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图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。下列不正确的是( )

A. 图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖连接
B. 若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段,其产物长度为537bp、790bp、661bp
C.若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后形成重组质粒,那么应选用的限制酶是MboI
D.在导入重组质粒后,为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌,一般需要用添加相应抗生素的培养基进行培养

C

解析试题分析:
A项中,DNA单链中相邻两个碱基之间通过“脱氧核糖—磷酸—脱氧核糖”连接,正确;
B项中,Sma I识别的序列为CCCGGG,切割后会产生平末端;图1所示的DNA分子中含有两个Sma I的识别位点,第一个识别位点在左端534bp序列向右三个碱基对的位置;第二个识别位点在右端658bp序列向左三个碱基对的位置,从这两个位点切割后产生的DNA片段长度分别为534+3,796-3-3,658+3,即得到的DNA片段长度分别为537bp、790bp和661bp,正确。
C项中,能够获取目的基因并切开质粒的限制酶有识别序列为GGATCC的BamH I和识别序列为GATC的Mbo I,若使用Mbo I会同时破坏质粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因,所以要用BamH I来切割目的基因和质粒,切割后保留了完整的抗生素B抗性基因,便于筛选出含有重组质粒的大肠杆菌。错误。
D项中,重组质粒含有抗生素抗性基因,因此成功导入目的基因的大肠杆菌可以抗抗生素,因此一般需要用添加相应抗生素的培养基进行筛选。正确。
考点:基因工程的操作程序
点评:本题有一定的难度,是一道高考题的变式,考查了学生的识图能力、审题能力、理解能力。

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(13分)图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题:

(1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由______连接。
(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段,产生的末端是_______末端,其产物中有_____种不同的DNA片段。
(3)若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段,用限制酶Sma Ⅰ完全切割,产物中共有_____种不同DNA片段。
(4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是_________。在导入重组质粒后,为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌,一般需要用添加_____的培养基进行培养。
(5)假设D基因是抗棉铃虫的Bt毒蛋白基因,将D基因转入棉花培养成转基因抗虫棉,如果__________________和_____________________,即可分别在分子水平和个体水平上说明抗虫基因已成功表达。

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(1)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段,产生的末端是       末端,其产物长度为                                          

(2)若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段,用限制酶Sma Ⅰ完全切割,产物中共有       种不同DNA片段。

(3)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是         。在导入重组质粒后,为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌,一般需要用添加                 的培养基进行培养。经检测,部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达,其最可能的原因是                           

                                                           

 

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(1)若用限制酶Sma I完全切割图1中所示DNA片段,则其产物有______种,长度分别为______。

(2)若将图2中质粒和目的基因通过同种限制酶处理后进行连接,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是______。

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(1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由______连接。

(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段,产生的末端是_______末端,其产物中有_____种不同的DNA片段。

(3)若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段,用限制酶Sma Ⅰ完全切割,产物中共有_____种不同DNA片段。

(4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是_________。在导入重组质粒后,为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌,一般需要用添加_____的培养基进行培养。

(5)假设D基因是抗棉铃虫的Bt毒蛋白基因,将D基因转入棉花培养成转基因抗虫棉,如果__________________和_____________________,即可分别在分子水平和个体水平上说明抗虫基因已成功表达。

 

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