[题目]真核生物基因中通常含有内含子.而原核生物基因中没有.原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制.下图表示基因文库的制备和从基因文库中提取胰岛素基因的过程.回答下列问题:(1)从基因结构分析.与基因组文库中的基因相比.从cDNA文库中获得的目的基因缺少的结构有等.图中①过程中存在的碱基配对方式有 ,②过程所用的工具� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

【题目】真核生物基因中通常含有内含子，而原核生物基因中没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。下图表示基因文库的制备和从基因文库中提取胰岛素基因的过程。回答下列问题：

（1）从基因结构分析，与基因组文库中的基因相比，从cDNA文库中获得的目的基因缺少的结构有______（至少写两个）等。图中①过程中存在的碱基配对方式有___________（模板上的碱基在前）；②过程所用的工具酶有_____________________。

（2）为了便于导入基因，细菌培养基中一般加入___________，理由是___________。

（3）依据图中杂交结果，应选取培养基上___________（填字母）菌落继续培养，才能获得还有胰岛素基因的受体菌。

（4）从大肠杆菌中获得的“胰岛素”未能达到期待的生物活性，从细胞结构角度分析，其原因是_______。

【答案】启动子、终止子、内含子 A-T、U-A、G-C、C-G 限制酶，DNA连接酶 CaCl2（或钙离子) 钙离子使细菌处于感受态（或钙离子能提高细菌从外界吸收DNA的能力） b 大肠杆菌中缺少对胰岛素进行加工和修饰的内质网和高尔基体

【解析】试题分析：基因组文库是指包含某种生物的全部基因组成的基因文库，其中含有的每个基因结构完整，不仅含有能编码蛋白质的编码序列，还含有非编码序列；cDNA文库仅仅是某生物体细胞内提取的部分mRNA为模板，经反转录产生cDNA,其所包含的基因不仅数量少，而且每个基因的结构不完整，即基因中没有启动子、终止子、内含子等结构。分析图解过程：①为逆转录过程；②为基因表达载体的构建过程；③为目的基因导入受体细菌的过程；④是将对应的受体菌落移到有用32P标记的胰岛素基因探针的培养基上；⑤为培养对应位置上的a、b、c、d、e 五个菌落，如果出现杂交带，则说明该菌落中含有胰岛素基因。从图示对比发现，只有b菌落出现杂交带，即b菌落含有所需的胰岛素基因。

（1）根据前面的分析可知，从基因结构分析，与基因组文库中的基因相比，从cDNA文库中获得的目的基因缺少启动子、终止子、内含子等结构。图中①过程中mRNA与cDNA配对，所以存在的碱基配对方式有A-T、U-A、G-C、C-G；构建基因表达载体需要用限制酶切割目的基因和载体，同时需用DNA连接酶进行连接。

（2）为了便于导入含目的基因的表达载体，细菌培养基中一般加入CaCl2（或钙离子)，原因是钙离子能使细菌处于感受态，使基因表达载体更容易进入受体细菌内。

（3）依据前面的分析可知，应选取培养基上b菌落继续培养，才能获得含有胰岛素基因的受体菌。

（4）从细胞结构角度分析，由于大肠杆菌是原核生物，细胞内缺少对胰岛素进行加工和修饰的内质网和高尔基体，所以从大肠杆菌中获得的“胰岛素”没有期待的生物活性。

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