Question

8．Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图1：

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的细胞核．
（2）步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期时，可从其内细胞团分离出ES细胞．
（3）步骤③中，导入基因前可以利用PCR技术扩增Rag₂基因片段．图2为质粒限制酶酶切图谱．Rag₂基因不含图中限制酶识别序列．为使PCR扩增的Rag₂基因重组进该质粒，扩增的Rag₂基因两端需分别引入NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的识别序列．PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上．

（4）为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质，用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验．
（5）利用ES细胞能培育出造血干细胞，其根本原理是诱导基因选择性表达．在体外诱导培养时，培养液中需加入血浆、血清等天然成分．

Answer 1

分析 分析图1：①表示核移植过程；②表示早期胚胎培养过程；③表示将目的基因导入ES细胞．
分析图2：表示质粒限制酶酶切图谱．基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因．启动子是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列，是基因的一个组成部分，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度．终止子是给予RNA聚合酶转录终止信号的DNA序列．

解答 解：（1）核移植是将体细胞核移植到去核的卵母细胞中，所以实验前要去除卵母细胞的细胞核．
（2）内细胞团位于囊胚中，所以重组胚胎培养到囊胚期．
（3）在基因表达载体的构建中，目的基因插入到启动子和终止子之间，启动子和终止子之间有Ndel、XbaⅠ、BamHⅠ三种限制酶识别和切割位点．据图可知，终止子的两端有XbaⅠ限制酶切割位点，因此不能使用XbaⅠ限制酶切割质粒，故只能用Ndel和BamHⅠ限制酶切割质粒．目的基因与质粒具有相同的粘性末端才可以连接形成重组质粒，所以目的基因两端需分别引入Ndel和BamHⅠ的识别序列．图中直接将两个脱氧核苷酸合成DNA单链，这不能反映DNA聚合酶的功能，因为DNA聚合酶只能在DNA模板存在的条件下，将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上．
（4）基因表达的产物是蛋白质，所以提取小鼠骨髓细胞的蛋白质进行抗原-抗体杂交．
（5）利用ES细胞能培育出造血干细胞，其根本原理是诱导基因选择性表达．在体外诱导培养时，培养液中需加入血浆、血清等天然成分．
故答案为：
（1）细胞核
（2）囊胚
（3）NdeⅠBamHⅠDNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上
（4）蛋白质
（5）诱导基因选择性表达     血浆、血清

点评 本题考查了胚胎工程和基因工程的相关知识，意在考查考生的识图能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，准确判断问题的能力．