Question

20．根据所学生物学知识回答下列问题：
（1）目前临床上使用的红细胞生成素（一种糖蛋白，用于治疗肾衰性贫血）主要来自基因工程技术生产的重组人红细胞生成素（rhEPO）．检测rhEPO的体外活性需用抗rhEPO的单克隆抗体．分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞，可由rhEPO免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成，在融合过程中至少需要进行2次筛选．
（2）在“试管牛”的培育过程中，采用激素处理可使良种母牛一次排出多枚卵母细胞，最常用的激素是促性腺激素．从良种公牛采集的精子需获能后才能进行受精作用；防止多精入卵的两道屏障依次为透明带反应、卵黄膜封闭作用
（3）生态系统内即使某个物种由于某种原因而死亡，也会很快有其他物种占据它原来的生态位置，从而避免系统结构或功能失衡．这体现了生态工程的什么原理B
A．协调与平衡原理      B．物种多样性原理      C．物质循环再生原理      D．整体性原理
（4）农杆菌介导法转基因需要利用农杆菌的Ti质粒完成，图1是Ti质粒的具体组成．（T-DNA区大小约17kb）

①若将图1中质粒用限制酶I与限制酶II进行完全酶切（各个片段大小不一致），并用凝胶电泳分离酶切后的片段，则电泳结果应为图2（箭头为电泳方向）中的A．
②为了筛选符合条件的农杆菌，可以在培养基中加入卡那霉素进行筛选．则可以在此培养基中生存的农杆菌类型为导入未重组的Ti质粒农杆菌及导入重组质粒的农杆菌．
③农杆菌介导法转基因原理如图3所示．当植物受伤时会产生一种信号分子，该信号会作用于农杆菌细胞表面的受体．试分析接受信号分子后农杆菌将T-DNA导入植物细胞的过程：激活vir区表达蛋白装配成通道复合体；激活vir区表达蛋白以诱导T-DNA区形成T复合体通过通道复合体进入植物细胞后整合进入植物基因组DNA．

Answer 1

分析 1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
2、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体．
3、胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理（选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体．用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理）；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存（对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段）；④对胚胎进行移植；⑤移植后的检查．

解答 解：（1）单克隆抗体是由杂交瘤细胞分泌的；杂交瘤细胞可由rhEPO免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成，在融合过程中至少需要进行2次筛选，第一次是筛选杂交瘤细胞，第二次是筛选能产生特异性抗体的杂交瘤细胞．
（2）给良种母牛注射促性腺激素可促使其超数排卵；精子需要获能后才能进行受精作用；防止多精入卵的两道屏障依次为 透明带反应、卵黄膜封闭作用．
（3）生态系统内即使某个物种由于某种原因而死亡，也会很快有其他物种占据它原来的生态位置，从而避免系统结构或功能失衡，这体现了生态工程的物种多样性原理．
（4）①图1中质粒有2个限制酶Ⅰ的切割位点，也有2个限制酶Ⅱ的切割位点，且该质粒用限制酶I与限制酶II进行完全酶切后产生的各个片段大小不一致，其中有一个片段比较大．因此，该质粒被限制酶I与限制酶II进行完全酶切后能产生4种大小不同的片段．故选：A．
②由于质粒中含有卡那霉素抗性基因，所以在培养基中加入卡那霉素进行筛选后，可以在此培养基中生存的农杆菌类型为导入未重组的Ti质粒农杆菌及导入重组质粒的农杆菌．
③根据图3，当植物受伤时会产生一种信号分子，该信号会作用于农杆菌细胞表面的受体．接受信号分子后农杆菌将T-DNA导入植物细胞的过程为：激活vir区表达蛋白装配成通道复合体；激活vir区表达蛋白以诱导T-DNA区形成T复合体通过通道复合体进入植物细胞后整合进入植物基因组DNA．
故答案为：
（1）杂交瘤      2
（2）促性腺激素    获能     透明带反应、卵黄膜封闭作用
（3）B
（4）①A
②导入未重组的Ti质粒农杆菌及导入重组质粒的农杆菌
③受体      激活vir区表达蛋白装配成通道复合体；激活vir区表达蛋白以诱导T-DNA区形成T复合体通过通道复合体进入植物细胞后整合进入植物基因组DNA

点评 本题结合图解，综合考查基因工程、胚胎工程和生态工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，能结合图中信息答题；识记体外受精的过程及胚胎移植的基本程序；识记生态工程的基本原理，能结合所学的知识准确答题．