Question

【生物--现代生物科技专题】
某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、Bam HI三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉索基因．利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题．

（l）在构建重组质粒时，应选用

 

两种限制酶对

 

进行切割，然后进行连接，以保证重组DNA序列的唯一性．
（2）为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加

 

，理由是

 

．
（3）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用

 

技术，即通过

 

和

 

两个主要过程最终形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加

 

．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术,植物培养的条件及过程

专题：

分析：分析题图：质粒和含抗盐基因的DNA片段上均有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制性核酸内切酶酶切位点．
在质粒上，这三种限制酶的切割位点都位于抗四环素基因上，用其任何一种酶都会破坏四环素抗性基因；在含抗盐基因的DNA片段上，BamHⅠ位于目的基因上，用BamHⅠ切割会破坏目的基因．

解答： 解：（1）BamHI的酶切位点在目的基因（抗盐基因）中，若用此限制酶，会破坏目的基因的结构，最终得不到转基因抗盐烟草，所以选用SalⅠ和HindⅢ对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割．
（2）由于SalⅠ和HindⅢ的酶切位点在抗四环素基因中．在构建重组质粒时，抗四环素基因结构遭到破坏，故只能在培养基中加入氨苄青霉素来筛选导入重组质粒的农杆菌．
（3）采用植物组织培养技术可将植物细胞培育成完整的植株．植物组织培养过程中，主要经过脱分化和再分化形成完整植株，此过程须向培养基中加入植物激素（如生长素和细胞分裂素）．
故答案为：
（l）SalⅠ和HindⅢ质粒和抗盐基因的DNA
（2）氨苄青霉素  重组质粒中含抗氨苄青霉素基因而抗四环素基因被破坏
（3）植物组织培养  脱分化  再分化  植物激素（植物生长调节剂或生长素和细胞分裂素）

点评：本题结合题图考查基因工程的相关知识，特别是基因表达载体的构建过程，要求考生明确该步骤需要限制酶和DNA连接酶，至于需要哪种或哪几种限制酶，需要考生分析题图，选择的限制酶要能切割含有目的基因的外源DNA分子和质粒，但不能破坏目的基因；考生要明确植物基因工程需要借助于植物组织培养技术，并且能够识记植物组织培养的过程和条件．