Question

【题目】小麦、水稻等作物增产是长期使用化肥、农药、植物生长调节剂等的结果，而使用氮肥增多，不仅导致作物品质下降，还会污染环境。把固氮微生物的固氮基因导入小麦、水稻等农作物细胞内，让其自行固氮可解决此问题。回答下列问题：

（1）固氮菌有自生固氮菌（可自行固氮）和共生固氮菌（如和豆科植物形成根瘤后才能固氮的根瘤菌）。对土壤中的固氮微生物进行选择通常用的是________（填“有机氮”“无机氮”或“不加氮”）源培养基，培养基中培养的是_________（填“自生固氮菌”或“共生固氮菌”）。

（2）为筛选出自生固氮菌，需要在制备的培养基中添加的基本营养物质包括水、碳源和________，该培养基能筛选出目的菌株的原因是___________。

（3）为检验培养基及培养皿灭菌是否合格，可采取的措施是__________。

（4）现将10mL的固氮菌培养液进行梯度稀释，通常是梯度稀释10倍，即取1mL接种到_________mL的培养液中。分别取0．1mL稀释倍数为105的样液接种到5个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为39、41、42、43、45，则1mL悬液中活菌数量为____个，上述过程采用的接种方法是____________。

Answer 1

【答案】不加氮 自生固氮菌 无机盐 只有自生固氮微生物才能在无氮培养基上形成菌落，其他微生物不能生长 取含培养基的空白平板在适宜条件下培养，观察培养基上是否形成菌落 9 4．2×107 稀释涂布平板法

【解析】

进行系列稀释操作的步骤是：取盛有9mL水的无菌试管6支，并按101~106的顺序编号，用灼烧冷却的移液管吸取1mL菌液注入编号为101试管中，并吹吸3次，使之混匀，从101倍液中吸取1mL菌液注入到编号为102试管内吹吸均匀，获得102倍液，依此类推。

（1）对土壤中的固氮微生物进行选择通常用的是不加氮源的选择培养基，能在培养基上正常生长的就是有固氮能力的自生固氮菌。

（2）各种培养基的配方虽然不同，但一般含有水、碳源、氮源和无机盐，因为该培养基为缺少氮源的选择培养基，故还需要添加无机盐；因为培养基中缺少氮源，所以只有自生固氮微生物才能在其上正常生长。

（3）为检验培养基及培养皿灭菌是否合格，可取含培养基的空白平板在适宜条件下培养，观察培养基上是否形成菌落，如果没有菌落形成则说明合格。

（4）梯度稀释10倍，即取1mL接种到9mL的培养液中，由题干可知5个培养基上菌落的平均数为42个，则1mL悬液中活菌数量为42×105×10=4.2×107个，进行菌落计数需用稀释涂布平板法接种。