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    12．如图是利用农杆菌转化法培育转苏云金杆菌（Bt）毒素蛋白基因植物的过程示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），表格内是3种相关限制酶的识别序列与酶切位点示意图．

    （1）图1过程②是基因工程基本步骤，称为将目的基因与运载体重组．
    （2）运用HindⅢ与BamHⅠ酶切目的基因与质粒，并加入DNA连接酶来构建重组质粒的方法的缺点是该种方法会产生4种重组质粒，不利于筛选．为了改善上述问题，可以改用BstⅠ或BamHⅠ酶．
    （3）本实验选用的运载体是图中的pBR质粒和Ti质粒，他们的基本单位是脱氧核苷酸．
    （4）下列关于质粒运载体的说法正确的是ACDE（多选）．
    A．质粒运载体作用之一是防止目的基因被核酸酶降解
    B．质粒运载体只能在与目的基因重组后进入细胞
    C．目的基因插人质粒后，不能影响质粒运载体的复制和表达
    D．③中Ti质粒的T-DNA片段可以协助目的基因导入植物细胞
    E．没有限制酶就无法使用质粒运载体．

    分析 根据题意和图示分析可知：图示是利用农杆菌转化法培育转苏云金杆菌（Bt）毒素蛋白基因植物的过程示意图，其中①表示目的基因，②表示基因表达载体的构建过程，③表示将目的基因导入农杆菌细胞；④表示采用农杆菌转化法将目的导入植物细胞．

    解答 解：（1）图1②表示基因表达载体的构建过程．
    （2）运用HindⅢ与BamHI酶切目的基因与质粒，并加入DNA连接酶来构建重组质粒的方法会产生4种重组质粒，不利于筛选，为了改善上述问题，可以改用BstI或BamHI酶．
    （3）由图可知，本实验选用的运载体是pBR质粒和Ti质粒，它们都是双链环状DNA分子，因此基本单位是脱氧核苷酸．
    （4）A、质粒运载体作用之一是防止目的基因被核酸酶降解，A正确；
    B、质粒运载体本身可以进入细胞，不一定要与目的基因重组，B错误；
    C、目的基因插人质粒后，不能影响质粒运载体的复制和表达，C正确；
    D、Ti质粒的T-DNA片段可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上，因此可以协助目的基因导入植物细胞，D正确；
    E、作为运载体要有限制酶的切割位点，因此没有限制酶就无法使用质粒运载体，E正确．
    故选：ACDE．
    故答案为：
    （1）将目的基因与运载体重组
    （2）该种方法会产生4种重组质粒，不利于筛选  BstⅠ或BamHⅠ
    （3）pBR质粒和Ti质粒 脱氧核苷酸
    （4）ACDE

    点评 本题结合利用农杆菌转化法培育转苏云金杆菌（Bt）毒素蛋白基因植物的过程示意图，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤，能正确分析题图，同时能结合图中信息准确答题．

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    （2）6号为纯合体的概率为0，9号是杂合体的概率为$\frac{2}{3}$．
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    ⑦如果在低倍镜下看不到细胞，可改用高倍镜继续观察
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    A．①②⑤⑦B．②⑤⑧C．③④⑥D．⑤⑧

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