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    下面是在农杆菌Ti质粒基础上构建的植物抗虫基因表达载体的示意图。请据图回答：

    （1）为了扩大基因表达载体的数量，需将基因表达载体再植入农杆菌中并对农杆菌进行培养，此时，在培养农杆菌的培养基中应加入________，该培养基按用途划分属于________。

    （2）带有抗虫基因的农杆菌进入棉花细胞后，要检测抗虫基因是否插入到棉花的染色体DNA上，常用的方法是________；要检测抗虫基因在棉花体内是否翻译成蛋白质，必需先从转基因棉花中提取蛋白质，再用相应的________方法来确定是否已形成毒蛋白；如果在个体水平上鉴定抗虫基因是否转化成功，可以通过________实验来实现。

    （3）Ti质粒的分子大小有200 kb（千碱基对）左右，然而能进入植物细胞的只有一小部分约25 kb（称为T－DNA）。在这一小部分的两端各有一个25 bp（碱基对）长的重复序列LB和RB，这两个序列对这一小部分DNA进入植物细胞是不可缺少的。实验证明只要Ti质粒上保留了这两个序列，即使这两个序列之间的其它序列被不同程度地改变（如插入一个外源DNA片段），这一小部分也仍然可以转移并整合到植物的基因组中。

    ①在构建的T－DNA过程中，还应该具有________和________等结构，才能保证进入植物体的抗虫基因能够顺利表达。

    ②Ti质粒不同于其它质粒的最大特点就是它含有T－DNA，如果给你一个不含T－DNA的质粒，你如何把它构建成含有T－DNA的质粒？________。

    答案：
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    科目：高中生物 来源：福建省三明一中2012届高三第二次学段考生物试题 题型：071

    下面是一项“利用转基因番茄生产人胰岛素的方法”的专利摘要，请回答：

    发明利用转基因番茄作为生物反应器生产人胰岛素。所用的人胰岛素基因是依据植物偏爱密码子的原则来设计所含的密码子，通过人工合成若干DNA片段，拼接而成，并且在C端加上KDEL的内质网滞留序列，避免胰岛素在植物细胞中的降解。将该基因置于CaMV 35S启动子和果实专一性启动子2A12的驱动之下通过农杆菌介导的方法转入番茄中，在番茄的果实中表达人胰岛素。

    （1）此基因工程中的目的基因是_________，将人工合成的DNA片段拼接在一起，所需要的酶有_________。

    （2）要想在体外获得大量该目的基因的片段，可以采用_________技术。

    （3）试分析在C端加上KDEL的内质网滞留序列，为什么可以避免胰岛素在植物细胞中的降解？_________。

    （4）用目的基因与农杆菌的Ti质粒结合构建表达载体，该表达载体的组成中不应含有的是_________（从下列选项中选择）。

    ①目的基因

    ②CaMV 35S启动子

    ③果实专一性启动子2A12

    ④RNA引物

    ⑤标记基因

    ⑥T-DNA

    ⑦RNA聚合酶基因片段

    ⑧终止子

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    科目：高中生物 来源：2014届天津市六校高三上学期第一次联考生物试卷（解析版） 题型：综合题

    （16分）Ⅰ.（8分）土壤农杆菌是一种能引起双子叶植物产生冠瘿瘤的土壤细菌，它带有一个大的质粒叫Ti质粒，它是携带细菌DNA向宿主植物基因组转化所需信息的重要片段，只有T—DNA片段才转入植物细胞的基因组。结构及转化过程如图所示，回答相关问题：

    （1）为了使某种植物具有抗旱性状而又不引起植物产生冠瘿瘤，需对Ti质粒进行修饰，即祛除瘤基因，将抗旱基因转移至________，然后在一定条件下将外植体在含土壤农杆菌的稀释培养基上培养，此时修饰的T—DNA转入植物细胞并整合到植物基因组中。以上过程需要的工具有                                          。

    （2）将上述外植体置于一个含有某种抗生素的合适培养基中进行筛选，发生转化的外植体开始增殖，形成________      ，通过产生不定芽再长出整个植物。

    （3）基因转化是否成功应对转基因植物进行鉴定，可以直接在________水平对转基因植物与非转基因植物进行比较。

    Ⅱ．（8分）请回答基因工程方面的有关问题：

    (1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如图所示）。

    （1）图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。

    ①从理论上推测，第四轮循环产物中不含有引物B的DNA片段所占的比例为      。

    ②在第    轮循环产物中首次出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。

    （2）PCR反应体系中含有的DNA聚合酶具有           特点，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为                   。

     

     

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    科目：高中生物 来源：2010～2011学年度黑龙江省高二下学期期中考试生物试卷 题型：综合题

    （16分）下面是在农杆菌Ti质粒基础上构建的植物抗虫基因表达载体的示意图。请据图回答：

    （1）为了扩大基因表达载体的数量，需将基因表达载体再植入农杆菌中并对农杆菌进行培养，此时，在培养农杆菌的培养基中应加入              ，该培养基按用途划分属于 。

    （2）带有抗虫基因的农杆菌进入棉花细胞后，要检测抗虫基因是否插入到棉花的染色体DNA上，常用的方法是               ；要检测抗虫基因在棉花体内是否翻译成蛋白质，必需先从转基因棉花中提取蛋白质，再用相应的   方法来确定是否已形成毒蛋白；如果在个体水平上鉴定抗虫基因是否转化成功，可以通过   实验来实现。

    （3）Ti质粒的分子大小有200kb（千碱基对）左右，然而能进入植物细胞的只有一小部分约25kb（称为T—DNA）。在这一小部分的两端各有一个25bp（碱基对）长的重复序列LB和RB，这两个序列对这一小部分DNA进入植物细胞是不可缺少的。实验证明只要Ti质粒上保留了这两个序列，即使这两个序列之间的其它序列被不同程度地改变（如插入一个外源DNA片段），这一小部分也仍然可以转移并整合到植物的基因组中。

    ①  在构建的T—DNA过程中，还应该具有和  等结构，才能保证进入植物体的抗虫基因能够顺利表达。

    ②Ti质粒不同于其它质粒的最大特点就是它含有T—DNA，如果给你一个不含T—DNA的质粒，你如何把它构建成含有T—DNA的质粒？               。

     

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    科目：高中生物 来源：2010～2011学年度黑龙江省哈六中高二下学期期中考试生物试卷 题型：综合题

    （16分）下面是在农杆菌Ti质粒基础上构建的植物抗虫基因表达载体的示意图。请据图回答：

    （1）为了扩大基因表达载体的数量，需将基因表达载体再植入农杆菌中并对农杆菌进行培养，此时，在培养农杆菌的培养基中应加入             ，该培养基按用途划分属于。
    （2）带有抗虫基因的农杆菌进入棉花细胞后，要检测抗虫基因是否插入到棉花的染色体DNA上，常用的方法是              ；要检测抗虫基因在棉花体内是否翻译成蛋白质，必需先从转基因棉花中提取蛋白质，再用相应的  方法来确定是否已形成毒蛋白；如果在个体水平上鉴定抗虫基因是否转化成功，可以通过  实验来实现。
    （3）Ti质粒的分子大小有200kb（千碱基对）左右，然而能进入植物细胞的只有一小部分约25kb（称为T—DNA）。在这一小部分的两端各有一个25bp（碱基对）长的重复序列LB和RB，这两个序列对这一小部分DNA进入植物细胞是不可缺少的。实验证明只要Ti质粒上保留了这两个序列，即使这两个序列之间的其它序列被不同程度地改变（如插入一个外源DNA片段），这一小部分也仍然可以转移并整合到植物的基因组中。
    ① 在构建的T—DNA过程中，还应该具有和 等结构，才能保证进入植物体的抗虫基因能够顺利表达。
    ②Ti质粒不同于其它质粒的最大特点就是它含有T—DNA，如果给你一个不含T—DNA的质粒，你如何把它构建成含有T—DNA的质粒？              。

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