[题目]如图所示为A.B.C三种质粒和一个含目的基因D的DNA片段示意图.图中Ap为氨苄青霉素抗性基因.Tc为四环素抗性基因.lacZ为蓝色显色基因.图中EcoR Ⅰ.Pvu Ⅰ为两种限制酶.质粒上限制酶括号内的数字表示限制酶切割位点与复制原点的距离.回答下列问题. (1) 图中三种质粒中不能作为目的基因运载体的是 .理由是 . .(2) 在基因工程的操作� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】如图所示为A、B、C三种质粒和一个含目的基因D的DNA片段示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因。图中EcoR Ⅰ、Pvu Ⅰ为两种限制酶，质粒上限制酶括号内的数字表示限制酶切割位点与复制原点的距离。回答下列问题。

(1) 图中三种质粒中不能作为目的基因运载体的是________，理由是________、________。

(2) 在基因工程的操作过程中，需要检查目的基因是否重组到质粒中，应使用________酶切重组质粒，完全酶切后，进行电泳检测。若电泳图谱中出现长度为1.1kb和5.6 kb，或者________kb和________kb的片段，则可判断该重组质粒已与目的基因重组成功。

(3) 为研究目的基因D的功能，研究人员用下图所示的引物组合分别扩增D基因的D1片段、D3片段(DNA复制子链的延伸方向5′→3′)。

注：引物Ⅱ、Ⅲ上的x，y片段分别与N基因两端互补配对

用引物Ⅰ、Ⅱ组合扩增后，得到的绝大部分DNA片段是下图中的________。

ab cd

②将大量N基因片段与扩增得到的D1片段、D3片段置于PCR反应体系中进行扩增，得到的绝大多数扩增产物是________(填“D1－N”或“D1－D3一N”或“D3－N”或“D1－N—D3”)。

【答案】质粒A、质粒C (质粒A)缺少标记基因 (质粒C) 复制原点会被限制酶切割 EcoRⅠ 3.1 3.6 d D1－N－D3

【解析】试题分析：分析题图：如图所示为三种质粒和一个含目的基因的DNA片段示意图，图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因；EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离。

（1）图中质粒A缺少标记基因；质粒C在用和目的基因相同的限制酶切割时，复制原点会被限制酶切割，会影响重组质粒的自主复制．因此，能作为目的基因运载体最理想的质粒是B。（2）分析图解可知，在目的基因上存在EcoRⅠ酶的切割位点，因此在基因工程的操作过程中，需要检查目的基因是否重组到质粒中，应使用该酶切重组质粒．目的基因和质粒B形成的重组质粒长度为2.7-0.1+（4.0-1.0）=5.6kb（质粒且切割后形成的大的片段+切割目的基因时形成的大片段）、0.1+1.0=1.1kb（质粒且切割后形成的小的片段+切割目的基因时形成的小片段）或2.7-0.1+1.0=3.6（质粒且切割后形成的大的片段+切割目的基因时形成的小片段）、0.1+3.0=3.6（质粒且切割后形成的小的片段+切割目的基因时形成的大片段）。

（3）①根据题图分析，用引物Ⅰ、Ⅱ组合扩增扩增的是D1片段，以引物Ⅱ所在的单链为模板在引物Ⅰ的作用下合成DNA时，引物Ⅱ上的X片段也被作为模板合成子链，因此得到的绝大部分DNA片段是图3中的d。

②由于引物Ⅱ、Ⅲ上的x、y片段都能与N基因两条链上的碱基进行互补配对，因此将大量N基因片段与扩增得到的D1片段、D3片段置于PCR反应体系中进行扩增，得到的绝大多数扩增产物是D1-N-D3，A2基因被敲除。

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