Question

【题目】我国科学家利用农杆菌介导法，将含高赖氨酸蛋白基因sb401的表达载体导入玉米细胞，最终培育出“转高赖氨酸蛋白基因sb401玉米”。结合图示回答问题：

（1）构建基因表达载体时，为了便于sb401基因与Ti质粒连接，应怎样处理含该基因的DNA分子和质粒？_____________________________________________。

（2）为了使③过程顺利进行，常用一定的方法处理农杆菌，使其处于_________________，以利于质粒的导入。为了培养出能稳定遗传的高赖氨酸转基因玉米，应将目的基因插入到农杆菌的_________上，便于使目的基因整合到水稻的___________上，通过组织培养得到转基因植株后，再进行____________即可得到稳定遗传的高赖氨酸转基因玉米。

（3）⑤为__________过程，除了为其提供适宜的温度、pH、必需的营养条件、植物激素、无菌条件外，通常还需_________________。

Answer 1

【答案】 分别用相对应的同一种限制酶同时切割含该基因的DNA分子和质粒 感受态 Ti质粒的T-DNA 染色体 连续自交、筛选 脱分化 适宜的温度、pH、营养条件、植物激素、无菌条件

【解析】试题分析：分析题图：图中①表示目的基因的获取，②表示基因表达载体的构建过程，③④表示采用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞；⑤表示脱分化过程；⑥表示筛选；⑦表示再分化形成完整植株的过程。

（1）构建基因表达载体时，需用同一种限制酶同时切割含该基因的DNA分子和质粒，以产生相同的黏性末端，这样便于sb401基因与Ti质粒连接。

（2）过程③将目的基因导入微生物（农杆菌）细胞常用感受态转化法，即用钙离子（或氯化钙）溶液处理农杆菌，使其转化为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态。农杆菌的Ti质粒上有可转移DNA（T-DNA），因此应该将目的基因插入该DNA，以便将目的基因整合到水稻的染色体DNA上；将含有目的基因的水稻细胞通过植物组织培养技术培养，在利用连续自交、筛选的方法可以获得稳定遗传的高赖氨酸转基因玉米。

（3）过程⑤为脱分化形成愈伤组织的过程，该过程需要适宜的温度、pH、营养条件、植物激素、无菌条件等，且需要避光培养。