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    如图是我国利用基因工程方法生产人生长激素的示意图．如图中的质粒是基因工程中常选用的载体一pBR322质粒，ampR表示青霉素抗性基因，tetR表示四环素抗性基因，限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同．据图回答下列问题：

    （1）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，③过程采用的酶是
     
    ，④过程采用的酶是
     
    ．
    （2）为了提高⑤过程的成功率，常用
     
    溶液处理大肠杆菌．作为受体的大肠杆菌细胞内，应不含
     
    基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌．
    （3）如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等，则形成的DNA片段有
     
    种，其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段占
     
    ．
    （4）按照图示的操作，将三角瓶中的大肠杆菌先接种到甲培养基上，然后分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置，一段时间后，菌落的生长状况如图所示．接种到甲培养基上的目的是筛选
     
    的大肠杆菌．
    （5）能否利用人的皮肤细胞来完成①过程？
     
    ．为什么？
     
    ．
    考点：基因工程的原理及技术,培养基对微生物的选择作用
    专题：
    分析：根据图示可知，含有重组质粒的大肠杆菌能在四环素培养基中生存，但不能在青霉素培养基中生存，可知切割质粒时应选用的酶是限制酶PstI，破坏了青霉素抗性基因．甲、丙培养基中含有四环素，因此能在甲和丙中生长的大肠杆菌含有四环素抗性基因，包括导入普通质粒和重组质粒的大肠杆菌；乙培养基中含有四环素和青霉素，因此能在乙中生长的是导入普通质粒的大肠杆菌．与丙相比，乙培养基中少了两个菌落，说明丙培养基中这两个菌落中的大肠杆菌成功导入了重组质粒．
    解答： 解：（1）由分析可知，破坏的是青霉素抗性基因，所以用限制酶PstI，而且要保证目的基因和质粒定向连接，所以不能形成相同的黏性末端，故另一种酶选EcoRI酶，将目的基因与运载体连接需要DNA连接酶．
    （2）将目的基因导入微生物细胞，常用CaCl2 处理，使之成为感受态细胞．由于质粒中含有青霉素抗性基因和四环素抗性基因，所以受体细胞大肠杆菌中不应含有这两种基因，以便于用筛选．
    （3）用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ进行切割，只有任意两个位点被切断且每次机会相等，任意两种酶切割会形成2个DNA片段，所以切割三次共有6个片段且这些片段不等，既得到6种．只有同时用PstI酶和FcoRI酶切割时会得到一个完整四环素抗性基因的DNA片段，故概率为
    1
    6
    ．
    （4）甲培养基中含有四环素，所以培养的是获得含有四环素抗性基因的大肠杆菌．
    （5）人的皮肤细胞内存在生长激素基因，但由于基因的选择性表达，人的皮肤细胞内不能合成生长激素mRNA，所以不能用人的皮肤细胞完成①过程．
    故答案为：
    （1）Pst I酶 和EcoR I酶  DNA连接酶
    （2）CaCl2    青霉素抗性基因和四环素抗性
    （3）6   
    1
    6

    （4）含四环素抗性基因
    （5）不能     人的皮肤细胞内存在生长激素基因，但由于基因的选择性表达，人的皮肤细胞内不能合成生长激素mRNA
    点评：本题考查基因工程相关知识，要求学生能从课外材料中获取相关的生物学信息，并能运用这些信息，结合所学知识解决相关的生物学问题．
    练习册系列答案
    年级 高中课程 年级 初中课程
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    科目：高中生物 来源： 题型：

    结合已经学习的关于细胞的实验，完成有关问题：
    （1）在检测生物组织可溶性还原糖时，斐林试剂的使用方法是：将0.1g/mL NaOH与0.05g/mL CuSO4等量混合，随用随配，然后在待测样液的试管中加入斐林试剂，摇匀后再将试管
     
    ，2min后观察试管中出现的颜色变化，如果出现砖红色沉淀则说明被测液中有可溶性还原糖．而双缩脲试剂则可以把蛋白质样液染成
     
    ．
    （2）在观察植物细胞的叶绿体时，是否需要染色剂？
     
    ．原因是
     
    ．在观察口腔上皮细胞的线粒体时，所用到的染色剂是
     
    ，线粒体被染成蓝绿色．
    （3）制备细胞膜的实验中，实验材料选用哺乳动物的成熟红细胞，原因是
     
    ，把红细胞浸泡在清水中，结果使细胞吸水涨破，然后分离提纯得到细胞膜．
    （4）利用含有甲基绿、吡罗红这两种物质的混合染色剂对真核细胞进行染色，显微镜观察可以发现，绿色主要位于
     
    中，该实验包括：取细胞→水解→冲洗涂片→染色→观察等步骤，其中水解所用的试剂是稀盐酸，其作用是
     
    和使DNA与蛋白质分离．

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    如图表示某生态系统中四中成分之间相互关系，以下相关叙述错误的是（　　）
    A、甲表示生产者，丁表示非生物的物质和能量
    B、乙不一定都是细菌
    C、图中所有箭头表示的碳流动均是CO2的形式进行
    D、丙1→丙2→表示一条食物链

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选．已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-．根据图示判断下列操作正确的是（　　）
    A、质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
    B、质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割
    C、目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割
    D、目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    如图表示某绿色植物细胞内部分代谢活动的相互关系，其中a、b、c代表不同的细胞器，①-⑤代表不同的物质．请据图回答问题．

    （1）写出以下结构或物质的名称：①
     
    ，③
     
    ，a
     
    ．
    （2）②在a内变为④所需的直接条件是
     
    ．
    （3）①在b内参与的反应是第
     
    阶段．
    （4）该细胞吸收K+，需要细胞膜上的
     
    和⑤，其中⑤的结构简式为
     
    ．
    （5）将该绿色植物置于完全黑暗处24 h后，给水稻提供H218O，继续置于黑暗环境，一段时间后除水外还能在
     
    （填物质名称）中检测到18O．

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    下列有关实验课题与相应方法的叙述，不正确的是（　　）
    A、分离细胞器可利用差速离心法
    B、纯化蛋白质可用电泳法、凝胶色谱法及纸层析法
    C、研究分泌蛋白的合成与分泌，利用了同位素标记法
    D、观察线粒体利用了甲基绿染液将线粒体染成绿色，再用显微镜观察

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    如图所示某植物上的绿叶经锡箔覆盖处理后在阳光照射24小时后，将其脱色并用碘液处理，结果有锡箔覆盖的位置不呈蓝色，而不被锡箔覆盖的部分呈蓝色，本实验证明（　　）
    ①光合作用需要CO2  ②光合作用需要光
    ③光合作用需要叶绿体      ④光合作用放出氧
    ⑤光合作用制造淀粉．
    A、①②B、③⑤C、②⑤D、①③

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    关于植物的遗传育种方式，下列说法错误的是（　　）
    A、三倍体无子西瓜的性状可以遗传，但它不是一个新物种．用一定浓度的生长素处理未授粉的四倍体西瓜幼苗，可获无子西瓜，这种性状不可遗传
    B、一个基因型为AaBbCc的植物（三对基因可自由组合），用其花粉离体培养获得n株幼苗，其中aabbCC的个体的比例为
    1
    8
    C、生产上通常采用喷施赤霉素的方式获得无籽葡萄
    D、一块水稻田中偶尔发现一株矮秆水稻，它连续自交后代都是矮秆，这种变异可能源自于体细胞或生殖细胞的基因突变

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    如图甲、乙表示水稻两个品种，A、a和B、b表示分别位于两对同源染色体上的两对等位基因，①～⑧表示培育水稻新品种的过程．下列说法错误的是（　　）
    A、①②操作简便，但培育周期长
    B、②和⑦的变异都属于基因重组
    C、③过程常用的方法是花药离体培养
    D、⑤与⑧过程的育种原理不相同

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