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    【题目】HIV属于逆转录病毒，是引起获得性免疫缺陷综合征的病原体。请回答下列问题：

    （1）在病毒的疫苗制备过程中，通常选择病毒体的某些蛋白（目的蛋白）作为疫苗制备的重要成分。用基因工程方法制备HIV的目的蛋白时，可通过提取出HIV中的RNA，以其作为模板，在______________的作用下合成_______，获取该目的蛋白的基因，构建重组表达载体，随后导入受体细胞，在此过程中所涉及的操作工具除了“运载体”以外，还会用到____________________________。

    （2）在基因表达载体构建后，需要将其导入受体细胞，但对于不同类型的受体细胞，目的基因的导入方法有所不同，如将目的基因导入动物细胞采用_______________________法，若导入微生物细胞则采用__________________法。

    （3）在目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测和鉴定过才能知道。可从分子水平进行检测，其分别是_____________________、_____________________和检测目的基因是否翻译成蛋白质。除了上述分子检测外，有时还需要进行______________的鉴定。

    【答案】逆转录酶??? cDNA（DNA）??? 限制性核酸内切酶或限制酶、DNA连接酶??? ）显微注射??? Ca2+处理??? 检测转基因生物染色体的DNA上是否插入目的基因??? 检测目的基因是否转录出了mRNA??? 个体生物学水平???

    【解析】

    基因工程技术的基本步骤：

    （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；

    （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；

    （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；

    （4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

    （1）用基因工程方法制备HIV的目的蛋白时，可通过提取出HIV中的RNA，以其作为模板逆转录出相应的cDNA（DNA），该过程中需要逆转录酶的催化；在基因工程中常用的操作工具有基因的“剪刀”——限制性核酸内切酶（简称限制酶）、基因的“针线”——DNA连接酶以及目的基因的“运载体”。

    （2）将目的基因导入受体细胞过程中，不同的生物需要采用不同的方法，若导入植物细胞则常用土壤农杆菌感染法、基因枪法等，若导入动物细胞则常用显微注射法，若导入微生物细胞则常用Ca2+处理法等方法。

    （3）在目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，在分子水平上可以从检测转基因生物染色体的DNA上是否插入目的基因、检测目的基因是否转录出mRNA以及目的基因是否翻译成蛋白质三个方面进行检测。除了分子水平检测以外，有时还需要进行个体生物学水平的鉴定，如抗病鉴定、活性鉴定等。

    练习册系列答案
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    B.基因型相同，表型一定相同

    C.在相同的环境下，表型相同，基因型一定相同

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    A.分裂间期?B.前期?C.中期?D.后期

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    组别

    1

    2

    3

    4

    5

    6

    1%淀粉溶液

    3

    ?

    3

    ?

    3

    ?

    2%蔗糖溶液

    ?

    3

    ?

    3

    ?

    3

    新鲜唾液

    ?

    ?

    1

    1

    ?

    ?

    蔗糖酶溶液

    ?

    ?

    ?

    ?

    1

    1

    本尼迪特试剂

    2

    2

    2

    2

    2

    2

    实验结果

    ?

    ?

    ?

    ?

    ?

    ?

    ?

    ?

    A.需将表格里的溶液同时加入对应组别的试管中

    B.组3和组6的实验结果说明酶的作用具有专一性

    C.组3～6要在37°C 恒温水浴保温是满足酶的最佳反应条件

    D.若组5中出现阳性反应，组1未出现，原因即是淀粉溶液中含有蔗糖

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