Question

18．关于科学探究问题
在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤．为修复被该除草剂污染的土壤，需要选育能高效降解该除草剂的细菌．
请完成下列选育的实验方案：
步骤一：菌种浸出液的制备：
（1）从使用过除草剂的土壤中获取一定量的样本，然后置于无菌水中，震荡一定时间，备用．
步骤二：配置菌种选育培养基并灭菌：
所配制的培养基的特点是固体和含不同浓度除草剂．
步骤三：
（1）划线接种
（2）在适宜的温度等条件进行倒置培养一定时间．
（3）观察选取在较高浓度下除草剂的培养基中大菌落．
（2）常用的接种划线工具是接种环．
某同学在纯化菌株时，划线接种后一段时间后，平板的第一划线区域长满致密的菌苔，第二划线区域无菌落，造成划线无菌落可能的操作失误是接种环灼烧后未冷却或接种划线未从第一区域开始．

Answer 1

分析 从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株．从土壤中分离目的菌要用固体的选择培养基；培养液中缺少大部分细菌可利用的氮源或有氧条件抑制了大部分细菌的生长；在固体培养基中，无透明带菌落利用的氮源主要是氮气；有透明带菌落利用的氮源主要是除草剂，据此可筛选出目的菌．

解答 解：（1）步骤一：由于该除草剂为含氮有机物，所以筛选能高效降解该除草剂的细菌，应在使用过除草剂的土壤取样，并使用含该除草剂为唯一氮源的选择培养基．
步骤二：所配制的培养基为固体培养基并需要配置含不同浓度除草剂的培养基．
步骤三：
   （2）接种后应该进行培养，即在适宜的温度等条件进行倒置培养一定时间．
   （3）观察选取在较高浓度下除草剂的培养基中大菌落．
（2）平板划线法的接种工具是接种环．根据题意分析，该同学的失误是接种环灼烧后未冷却组成菌种烫死，或接种划线未从第一区域开始，即二次划线起始时就没有菌种．
故答案为：
（1）使用过除草剂的土壤     固体   含不同浓度除草剂
（2）在适宜的温度等条件进行倒置培养一定时间
观察选取在较高浓度下除草剂的培养基中大菌落
（3）接种环      接种环灼烧后未冷却或接种划线未从第一区域开始

点评 微生物培养的实验，是“生物知识内容表”所列的生物实验，包括理解实验目的、原理、方法和操作步骤，考生需掌握相关的操作技能，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用及实验分析能力．