Question

人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得．流程如下：

（1）htPA基因与载体用

 

切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体．检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用

 

技术．
（2）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是

 

．为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行

 

．利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的

 

．
（3）若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到

 

，说明目的基因成功表达．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．
目的基因分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．

解答： 解：（1）htPA基因与载体需要用同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）切割，形成相同的黏性末端，然后再通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体．检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用DNA分子杂交（或核酸探针）技术，原理是碱基互补配对．
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其超数排卵．采集的精子需要经过获能（处理），才具备受精能力．利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的全能性．
（3）基因表达成功时可获得目的基因的产物，既在转htPA基因母羊的羊乳中检测到htPA（或人组织纤溶酶原激活物），说明目的基因成功表达．
故答案为：
（1）同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）    DNA分子杂交（或核酸探针）
（2）超数排卵    获能（处理）   全能性
（3）htPA（或人组织纤溶酶原激活物）

点评：本题考查了基因工程和胚胎工程的相关知识，要求考生能够识记基因工程的操作步骤；识记细胞全能性的概念等．