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    研究人员利用基因工程技术对肺癌的治疗进行了大量研究，肺部细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌．研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制．该基因工程技术基本流程如图所示，据图回答．

    （1）在基因工程中通常选择细菌质粒作为载体，原因是
     
    ；如果某质粒由1000个脱氧核苷酸组成，脱氧核苷酸平均分子量为a，则该质粒的质量为
     
    ．
    （2）图甲中在构建重组载体时，酶切目的基因和酶切质粒时，所用的限制酶可以不同，但是产生的粘性末端必须是
     
    ．
    （3）图甲中在将酶切后的目的基因导入到酶切后的质粒上时需要的酶是
     
    ，图乙中let-7基因转录过程需要的酶是
     
    ，这两种酶作用的化学键都是
     
    ．
    （4）EcoR I限制酶只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割．若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端．
     

    （5）原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养．原代培养随着培养时间的延长和细胞不断分裂，空间因素和营养因素会限制其进一步生长．此时就需要将培养物分割成小的部分（组织细胞分散开），重新接种到另外的培养器皿内再进行培养，这个过程就称为传代或者再培养．图甲中进行传代培养操作时，需要用
     
    酶处理贴附在原代培养培养皿壁上的细胞，以利于传代培养．
    （6）研究发现，let-7基因能影响RAS基因的表达，其影响机理如图乙所示．从分子水平的角度分析，其作用机理是
     
    ．
    （7）如图所示pBR322是目前常用的人工质粒载体．如果将BamHI处理后的pBR322质粒与用BgIⅡ处理得到的目的基因进行重组，并将重组质粒导入原本无ampR和tetR的大肠杆菌进行培养．为了检测重组质粒是否成功导入大肠杆菌，现将上述大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落．再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果（空圈表示与图二对照无菌落的位置）．与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是
     
    ，图三结果显示，多数大肠杆菌内导入的是
     
    ．
    考点：基因工程的应用,动物细胞与组织培养过程
    专题：
    分析：图1表示利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞，然后利用动物细胞培养技术培养肺癌细胞．
    图2可以看出，let-7基因能够转录通过加工产生无翻译功能的miRNA，该分子能够与RAS基因转录的RASmRNA发生碱基互补配对，从而影响癌基因RAS的表达．
    DNA分子合成时与蛋白质合成类似，也需要进行脱水缩合，一般脱去的水分子=脱氧核苷酸数-脱氧核苷酸链数．而质粒是环状DNA，因此脱去的水分子=脱氧核苷酸数．
    解答： 解：（1）质粒能作为基因工程运载体的原因有：能够在宿主细胞稳妥保存并复制自己、具有标记基因、具有多个酶切位点等．由于质粒为环状DNA分子，因此脱氧核苷酸形成DNA分子时需要脱去1000分子的水，因此如果脱氧核苷酸平均分子量为a，则该质粒的质量为1000a-18000．
    （2）图甲中在构建重组载体时，酶切目的基因和酶切质粒时，为防止目的基因或质粒互连可用不同的限制酶进行切割，但是切割产生的粘性末端必须是互补．
    （3）目的基因和质粒重组时，需要用DNA连接酶连接两个DNA片段之间的磷酸二酯键．基因转录过程需要RNA聚合酶的催化，该酶的作用位点也是磷酸二酯键．
    （4）画图时注意EcoR I限制酶在目的基因的两侧均有酶切位点，因此左右均形成两个相同的黏性末端，并且注意只能在G与A之间切割．
    （5）过程②表示动物细胞培养，培养过程中出现接触抑制现象后，可以用胰蛋白酶处理，使之分散成单个细胞，随后分装到新的培养瓶中进行传代培养．
    （6）据图2可知，let-7基因影响RAS基因表达的机理是：let-7基因转录产物miRNA与RAS基因转录产物RAS mRNA结合，使RAS基因翻译受到抑制，引起细胞中的RAS蛋白含量减少，进而导致癌细胞增殖受到抑制．
    （7）由于限制酶BamHI的识别位点刚好在四环素抗性基因上，因此插入后该基因灭活．因此与图二对照的图三空圈表示能抗氨苄青霉素，但不能抗四环素的细菌．因此图三结果显示，多数细菌导入了普通质粒．
    故答案为：
    （1）质粒进入受体细胞（宿主细胞）能稳妥保存并复制自己（有多个酶切位点，有标记基因）    1000a-18000
    （2）互补
    （3）DNA连接酶   RNA聚合酶    磷酸二酯键
    （4）见右侧

    （5）（胰）蛋白酶
    （6）let-7转录的无翻译功能的miRNA能与RAS mRNA特异性结合，抑制RAS蛋白质的合成
    （7）抗氨苄青霉素但不抗四环素    Pbr322Z质粒
    点评：本题考查基因工程的相关知识，意在考查考生能从课外材料中获取相关的生物学信息，并能运用这些信息，结合所学知识解决相关的生物学问题．
    练习册系列答案
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    科目：高中生物 来源： 题型：

    下列方案中不能制备出抗H1N1流感病毒单克隆抗体的是（　　）
    A、将H1N1流感病毒抗原的基因导入骨髓瘤细胞，并使该基因表达
    B、将抗H1N1流感病毒抗体的基因导入骨髓瘤细胞，并使该基因表达
    C、将产生抗H1N1流感病毒抗体的效应B细胞和骨髓瘤细胞融合，筛选出杂交瘤细胞并进行体外大规模培养
    D、将骨髓瘤细胞中的癌基因导入能产生抗H1N1流感病毒抗体的效应B细胞中，并使癌基因表达

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    回答下列关于细胞结构及其代谢的问题
    生命活动离不开细胞，因为细胞不仅是生命活动的结构单位，也是生命活动进行的场所．（在括号内填编号，横线上写文字）．

    （1）与叶肉细胞相比，图1细胞特有的细胞器是
     

    （2）图2发生的生理过程名称是
     
    ．该过程可发生在图1的细胞器
     
    中．
    （3）若图3细胞表示肝细胞，则甘油需转化为
     
    （物质），进入糖代谢；在①-⑥过程中，如肾上腺素含量增加，可以促进的过程是〔〕．若图3细胞表示脂肪细胞，在①-⑥过程中，不存在的过程是
     
    ．
    （4）血液中甘油三脂的主要携带者是
     
    ，这些携带者的结构中，含
     
    层磷脂分子．

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    回答下列有关细胞分裂的问题．
    不同的细胞周期长短不一．先利用3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷酸培养某种细胞一段时间后再移至普通培养基中培养，不同间隔时间取样，进行放射显影，在显微镜下观察计数，统计标记细胞的百分数．A：细胞核开始被标记；B：被标记细胞X开始进入分裂期；C：细胞X着丝点开始分裂；D：细胞X分裂成两个子细胞，被标记细胞数目在增加；E：标记细胞第二次进入分裂期；F：被标记细胞的比例在减少；G：被标记细胞的数目在减少．试回答：

    （1）该细胞分裂一次平均经历的时间为
     
    h．实验开始时细胞核中被标记的物质是
     
    ，图1中
     
    期（用图中字母表示）DNA分子稳定性最低，适于进行诱发突变．
    （2）被标记的细胞比例减少的原因
     
    ；
    被标记的细胞数目减少的原因
     
    ．
    （3）图2分裂状态位于图甲的
     
    （用图中字母表示）期的前段，细胞内含有
     
    个染色体组．

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    回答下列有关细胞的问题．
    洋葱（2n=16）为二倍体植物．为比较不同处理方法对洋葱根尖细胞分裂指数（即视野内分裂期细胞数占细胞总数的百分比）的影响，某研究性学习小组进行了相关实验，实验步骤如下：
    ①将洋葱的老根去除，经水培生根后取出．
    ②将洋葱分组同时转入质量分数为0.01%、0.1%的秋水仙素溶液中，分别培养24h、36h、48h；秋水仙素处理停止后再转入清水中分别培养0h、12h、24h、36h．
    ③剪取根尖，用Carnoy固定液（用3份无水乙醇、1份冰乙酸混匀）固定8h，然后将根尖浸泡在1mol/L盐酸溶液中5-8min．
    ④将根尖取出，放入盛有清水的培养皿中漂洗．
    ⑤用石炭酸-品红试剂染色．
    ⑥制片、镜检、计数、拍照．
    实验结果：不同方法处理后的细胞分裂指数（%）如下表．
    秋水仙素溶液 清水培养时间
    质量分数（%） 时间（h） 0 12 24 36
    0.01 24 10.71 13.68 14.19 14.46
    36 9.94 11.99 13.59 13.62
    48 7.98 10.06 12.22 11.97
    0.1 24 7.74 9.09 11.07 10.86
    36 6.12 7.87 9.98 9.81
    48 5.97 6.78 7.98 8.56
    （1）步骤③中“将根尖浸泡在1mol/L盐酸溶液中”的作用是
     
    ．
    （2）步骤⑥为了获得相应的观察视野，镜检时正确的操作过程是
     
    ．
    （3）根据所学的知识推测，石炭酸-品红试剂是一种
     
    性染料．
    （4）根据上表结果可以得出如下初步结论：
    ①质量分数为
     
    秋水仙素溶液诱导后的细胞分裂指数较高；
    ②本实验的各种处理中，提高细胞分裂指数的最佳方法是
     
    ．
    （5）如图为一位同学在步骤⑥所拍摄的显微照片，形成细胞a 最可能的原因是
     
    ．
    （6）现有未贴标签且染色体数目相同的三个细胞有丝分裂两个时期的6块装片，编成1～6号，且已知1、3号确定为同一细胞有丝分裂的两个时期，其他4块装片分别表示另两个细胞有丝分裂的两个时期，某同学按顺序观察，结果如下：
    编号 观察结果
    1与5 中心体发出星射线，染色体散乱排列
    2 细胞中部凹陷
    3与6 细胞中部形成了细胞板
    4 细胞两极发出纺锤丝，染色体散乱排列
    其中表示动物细胞有丝分裂前期与末期的装片依次是
     
    ．
    A．1、3号B．4、6号C．5、2号D．4、2号．

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    回答下列实验探究的问题．
    科学研究发现根的向地生长不仅与生长素有关，还与乙烯的作用有关．为了研究二者的关系，有人做了如下的实验：
    将某种开花植物的根尖放在含不同浓度生长素的培养液中，并加入少量蔗糖作为能源．发现在这些培养液中出现了乙烯，且生长素浓度越高，培养液中乙烯的浓度也越高，根尖生长所受的抑制也越强．
    （1）此实验中的自变量是
     
    ，因变量是
     
    ．需要严格控制的无关变量有
     
    （至少举出两种）．
    （2）为使实验更严谨，还需将另一些等量的根尖放在
     
    中，作为对照组．
    （3）据此实验结果，推测水平放置的植物根向地生长的原因是
     
    ．
    科学家研究发现，同种植物在高原地区长得较为矮小，原因是紫外光可促进生长素氧化分解，进而抑制植物生长．为验证紫外光抑制植物生长，请补充下列实验设计并完成相关的实验分析．
    材料用具：燕麦幼苗，适宜浓度的完全培养液，蒸馏水，琼脂块，刀片若干，40W白炽灯和紫外灯管等．
    （4）实验步骤
    步骤一：准备2个配有培养支架的烧杯，分别标记为A、B．向A、B两烧杯中加入等量且适量的完全培养液．
    步骤二：
     
    ，随机平均分成2组，分别放在A、B两烧杯中培养一段时间．
    其中A为对照组，B为实验组．
    步骤三：在培养过程中，A组用40W白炽灯照射，B组
     
    ．
    步骤四：切下A、两组B幼苗的胚芽鞘尖端，分别用琼脂块收集生长素，并对应标记为a、b．将a、b置于
     
    两侧，观察胚芽鞘的弯曲情况．
    （5）结果预测：
     
    ．

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    谷胱甘肽（分子式C10H17O6N3S）是存在于动植物和微生物细胞中的一种重要三肽，它是由谷氨酸（C5H9O4N）、甘氨酸（C2H5O2N）和半胱氨酸缩合而成的，则半胱氨酸可能的分子简式为（　　）
    A、C3H3N
    B、C3H5ONS
    C、C3H7O2NS
    D、C3H3O2NS

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    需氧型生物与厌氧型生物的根本区别在于（　　）
    A、参加呼吸作用的原料不同
    B、两类生物的生活环境不同
    C、细胞中参与呼吸作用的酶不同
    D、控制酶合成的基因不同

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    科目：高中生物 来源： 题型：

    2个基因型为
     AB 
    .
    ab
    的精原细胞，在形成精子的过程中，1个细胞中的染色体发生了交换，另1个细胞的染色体末发生交换，则产生的精子中，基因型为AB、ab、Ab、aB的数目分别是（　　）
    A、4、4、1、l
    B、3、3、l、1
    C、2、2.2、2
    D、2、2、1、1

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