Question

【题目】图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．请回答下列问题：

（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由__（基团）连接。

（2）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是__末端，其产物长度为_____。

（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T﹣A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有____种不同DNA片段。

（4）启动子是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的____，它是__识别与结合的位点，促进转录的开始。

（5）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是_____。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加____的培养基进行培养。

Answer 1

【答案】 脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖 平 537bp、790bp、661bp 4 首端 RNA聚合酶 BamH I 抗生素B

【解析】试题分析：根据图1分析，DNA片段含有两个SmaⅠ识别位点，第一个识别位点在左端534bp序列向右三个碱基对的位置；第二个识别位点在右端658bp序列向左三个碱基的位置。根据图2分析，若使用MboI会同时破坏质粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamHI来切割目的基因和质粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于筛选出含有重组质粒的受体细胞。

（1）一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖连接。

（2）限制酶SmaⅠ的酶切位点是CCC↓GGG，其切割产生的是平末端。图1中DNA片段含有两个SmaⅠ酶切位点，被SmaⅠ酶完全切割后出现三个长度的片段，分别是537bp、790bp、661bp。

（3）杂合子的基因型为Dd，其中D基因片段有两个SmaⅠ酶切位点，完全切割后出现三个片段长度分别是537bp、790bp、661bp，发生基因突变后的d基因片段只有一个SmaⅠ酶切位点，完全切割后出现两个片段长度分别是1327bp、661bp，所以从杂合子中分离的DNA片段被限制酶SmaⅠ完全切割后形成会4种不同的DNA片段。

（4）启动子是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，启动子是RNA聚合酶的识别和结合位点，能启动转录过程。

（5）限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位点位于目的基因D上，若用这两种酶切割会被破坏目的基因D；运载体的两个标记基因上都有限制酶MboⅠ的切割位点，用该酶切割会破坏这两个标记基因，因此只能选用限制酶BamHⅠ切割外源DNA分子和运载体。用限制酶BamHⅠ切割质粒会破坏抗生素A抗性基因，但不会破坏抗生素B抗性基因，所以导入重组质粒的大肠杆菌能在含有抗生素B的培养基上生存，因此为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加抗生素B的培养基培养。