[题目]图一为含有目的基因的DNA(外源DNA).图二为某质粒.表中是几种限制酶识别序列及其切割位点.用图中的外源DNA与质粒构建重组质粒.请根据上述信息分析回答:限制酶BamⅠSmaⅠEcoRⅠHinRⅢ识别序列及切割位点[1]外源DNA有个游离的磷酸基团.[2]DNA分子的一条多核苷酸链中.两个脱氧核苷酸之间以和相连.用SmaⅠ限制酶切割外源DNA.切开的是和之� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

【题目】图一为含有目的基因的DNA（外源DNA），图二为某质粒，表中是几种限制酶识别序列及其切割位点。用图中的外源DNA与质粒构建重组质粒。请根据上述信息分析回答：

限制酶	BamⅠ	SmaⅠ	EcoRⅠ	HinRⅢ
识别序列及切割位点

【1】外源DNA有_____个游离的磷酸基团。

【2】DNA分子的一条多核苷酸链中，两个脱氧核苷酸之间以_____和_____相连。用SmaⅠ限制酶切割外源DNA，切开的是_____和_____之间相连的键。

【3】如果用SmaⅠ酶切割外源DNA和质粒来重组质粒，其结果是_____。

【4】如果使用EcoRⅠ酶切割外源DNA和质粒，将目的基因片段与切割后的质粒混合，加入_____酶，获得的环状DNA可能有哪几种情况？_____。

【5】如果使用BamHⅠ和HinRⅢ两种限制酶同时处理外源DNA和质粒，比用EcoRⅠ酶切割的优点是_____。

【6】将重组质粒导入大肠杆菌中，培养基中需加入_____进行鉴别和筛选含有重组质粒（目的基因）的细胞。

【答案】

【1】2

【2】磷酸基团五碳糖 G C

【3】目的基因与抗性基因被破坏

【4】 DNA连接原质粒切割的粘性末端重新连接；目的基因的粘性末端连接而成环状；目的基因与切割质粒形成重组质粒

【5】避免切割的外源DNA、质粒的粘性末端自身环化

【6】抗生素

【解析】

【1】图一中外源DNA为线性，因每条链上含有一个游离的磷酸基团，故外源DNA分子中有2个游离的磷酸基团。

【2】DNA分子的一条多核苷酸链中，两个脱氧核苷酸之间以磷酸基团和五碳糖相连。由题可知，SamⅠ识别的DNA序列只有G和C，故用SmaⅠ限制酶切割外源DNA，切开的是G和C之间相连的键。

【3】由图示可知，SmaⅠ酶切割位点位于抗性基因和目的基因中间，故如果用SmaⅠ酶切割外源DNA和质粒来重组质粒，其结果是目的基因与抗性基因被破坏。

【4】如果使用EcoRⅠ酶切割外源DNA和质粒，将目的基因片段与切割后的质粒混合，加入DNA连接酶，获得的环状DNA可能有原质粒切割的粘性末端重新连接、目的基因的粘性末端连接而成环状和目的基因与切割质粒形成重组质粒。

【5】如果使用BamHⅠ和HinRⅢ两种限制酶同时处理外源DNA和质粒，这样目的基因的两端的黏性末端不同，质粒的两端黏性末端也不同，故比用EcoRⅠ酶切割的优点是避免切割的外源DNA、质粒的粘性末端自身环化。

【6】由于重组质粒上有抗性基因和目的基因，故可通过抗性基因的特性进行筛选，为了鉴定重组质粒是否导入大肠杆菌中，可在培养基中加入抗生素进行鉴别和筛选含有重组质粒（目的基因）的细胞。

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