Question

回答有关生物技术的问题．
Ⅰ、抗体的制备经历了细胞学层面和分子学层面两种合成途径的研究．如图是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图1．

（1）在获取抗体之前，需要向健康人体注射特定抗原（如乙肝疫苗），并且每隔一周重复注射一次．免疫学细胞A在人体主要介导

 

免疫．
（2）过程①至②抗体的获取称为

 

，其中①是

 

过程．
Ⅱ、图1中，结构甲的建构可用图2和3表示．图2表示含有目的基因的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图3表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为下表所示．

限制酶	MspⅠ	BamHⅠ	MboⅠ	SmaⅠ
识别序列及切割位点

（3）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为

 

．
（4）若图2中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从杂合子中分离出图1及对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有

 

种不同长度的DNA片段．
（5）若将图3中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行拼接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是

 

．在导入重组质粒后，为了筛选出含有重组质粒的大肠杆菌，一般需要添加

 

的

 

（固体/液体）培养基进行培养．在培养前，培养基必须先经过灭菌，所用的方法是

 

；采用

 

的方法接种以获得单菌落后继续筛选．

Answer 1

考点：单克隆抗体的制备过程,基因工程的原理及技术

专题：

分析：分析图1，细胞A表示效应B细胞，细胞Y表示杂交瘤细胞，①过程表示动物细胞融合，②过程动物细胞培养，③过程提取信使RNA，④过程表示逆转录，⑤表示基因表达载体的构建，⑥表示导入受体细胞．
分析图2，DNA片段含有两个SmaⅠ识别位点，第一个识别位点在左端534bp序列向右三个碱基对的位置；第二个识别位点在右端658bp序列向左三个碱基的位置．
分析图3，若使用MboI会同时破坏质粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamHI来切割目的基因和质粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于筛选出含有重组质粒的受体细胞．

解答： 解：（1）向健康人体注射特定抗原，提取出A浆细胞（效应B淋巴细胞），在人体参与体液免疫．
（2）过程①至②抗体的获取称为单克隆抗体，其中①是细胞融合过程，Y细胞称为杂交瘤细胞．
（3）SmaⅠ识别的序列为GGGCCC，切割会产生平末端；图1中DNA片段含有两个SmaⅠ识别位点，第一个识别位点在左端534 bp序列向右三个碱基对的位置；第二个识别位点在右端658bp序列向左三个碱基的位置，从而两个位点切割后产生的DNA片段的长度分布为534+3，796-3-3，658+3，即得到的DNA片段长度为537、790、661．
（4）在杂合子体内含有基因D和基因d，基因D的序列中含有两个识别位点，经过SmaI完全切割会产生537bp、790bp和661bp三种不同长度的片段，基因d的序列中含有一个识别位点，经过切割后会产生1327bp和661bp两种长度的片段，综上，杂合子中分离到该基因的DNA片段经过切割后会产生4种不同长度的片段．
（5）能够获取目的基因并切开质粒的限制酶有识别序列为GGATCC的BamH I和识别序列为GATC的MboI，若使用Mbo I会同时破坏质粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamH I来切割目的基因和质粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于筛选出含有重组质粒的大肠杆菌．因为目的基因和运载体是用同种限制酶切割的，目的基因两端的末端和质粒切割后的两个末端都能进行互补，可能出现目的基因反向连接在运载体上的情况，导致基因D不能正确表达．在培养前，培养基常用高压蒸汽灭菌；采用划线（或涂布）的方法接种以获得单菌落后继续筛选．
故答案为：
（1）体液  
（2）单克隆抗体       细胞融合 
（3）537、790、661
（4）4
（5）BamHⅠ抗生素B      固体      高压蒸汽灭菌      平板划线（或涂布）

点评：本题考查单克隆抗体的制备、基因工程、微生物的培养等相关知识，意在考查学生识图能力、信息的提取与应用能力、通过比较与综合做出合理判断的能力等．