Question

【题目】下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindIII、SmaI指示线所示为三种限制酶的酶切位点。

据图回答：

（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用________限制酶，同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含____________的培养基上进行。

（2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是（______）（填字母代号）

A．启动子 B．tetR C．复制原点 D．ampR

（3）过程①可采用的操作方法是（______）（填字母代号）

A．农杆菌转化 B．大肠杆菌转化 C．显微注射 D．细胞融合

（4）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用（______）（填字母代号）技术。

A．核酸分子杂交 B． 基因序列分析 C．抗原—抗体杂交 D． PCR

（5）基因工程的四个基本操作步骤是_____________、_______________、_______________和_______________。

Answer 1

【答案】 HindⅢ和BamHⅠ 氨苄青霉素 A C C 获取目的基因 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定

【解析】试题分析：分析题图，图示是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线，包括基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、早期胚胎培养、胚胎移植等步骤，其中过程①是将重组质粒导入受体细胞；过程②需采用胚胎移植技术。

（1）外源DNA分子上含有限制酶BamHI、HindIII、SmaI的切割位点，其中限制酶SmaI的切割位点位于目的基因上，所以获取目的基因和构建基因表达载体时，应用限制酶HindⅢ和BamHⅠ。用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割质粒后，会破坏质粒上的四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含氨苄青霉素的培养基上进行。

（2）启动子是能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列，故选A。

（3）过程①是将重组质粒导入受体细胞，当受体细胞是动物细胞时，将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法，故选C。

（4）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用抗原-抗体杂交技术。

（5）基因工程的四个基本步骤是目的基因的获取、构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。