Question

在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因afp对提高农作物的抗寒能力有较好的应用价值．如图所示获得转基因莴苣的技术流程，请据图回答下列问题：
（1）进行基因工程操作，首先必须将含有抗冻蛋白基因的DNA分子从细胞内提取出来．在实验室中从鱼的红细胞中提取DNA，可以先根据DNA和蛋白质等在不同浓度的NaCI溶液中

 

的 不同，初步分离，然后进一步分离．在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会呈

 

色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂．
（2）①过程需要的酶有

 

、

 

．
（3）如果受体细胞C₁是土壤农杆菌，则导入它的目的是利用农杆菌的

 

，
使目的基因进入受体细胞C₂，并将其插入到受体细胞C₂中

 

上，使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达，形成转基因莴苣．经②过程获得的转基因莴苣中的目的基因是否表达，在分子水平上可用

 

方法进行检测，如果出现杂交带，说明目的基因已经表达蛋白质产品，转基因莴苣培育成功．
（4）若受体细胞为牛的受精卵，则受精卵分裂的方式为

 

，将此受精卵发育成的胚胎进行分割移植时，应选择发育良好、形态正常的

 

，要注意将

 

均等分割，否则会影响分割后的恢复和进一步发育．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术,胚胎分割移植

专题：

分析：（1）获取目的基因的主要途径有从自然界已有的物种中分离和人工合成．①DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl浓度的不同而不同．当NaCl的浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最低．利用这一原理，可使溶解在NaCl溶液中的DNA析出．②DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的其他许多物质溶于酒精溶液．利用这一原理，可以进一步提取含杂质较少的DNA．③DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色；DNA还有遇甲基绿溶液被染成蓝绿色的特性．上述两种方法均可用于鉴定DNA的存在．
（2）①过程为基因表达载体的构建过程，需要用到限制酶，切开特定的磷酸二酯键，形成粘性末端，DNA连接酶，连接磷酸二酯键．
（3）一个完整的基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因．
（4）农杆菌转化法利用的是农杆菌的转化作用，将目的基因整合到受体细胞的染色体DNA上，进而使目的基因能够稳定遗传和表达．检测目的基因是否成功表达可采用抗原--抗体杂交法．

解答： 解：（1）DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl浓度的不同而不同，DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色；DNA还有遇甲基绿溶液被染成蓝绿色的特性．
（2））①过程为基因表达载体的构建过程，需要用到限制酶，DNA连接酶．
（3）农杆菌转化法利用的是农杆菌的转化作用，将目的基因整合到受体细胞的染色体DNA上，进而使目的基因能够稳定遗传和表达．检测目的基因是否成功表达可采用抗原--抗体杂交法．
（4）受精卵的分裂方式为有丝分裂，胚胎移植时，需要在桑椹胚或囊胚时期，对内细胞团进行均等分割，否则会影响胚胎的恢复和发育．
故答案为：
（1）溶解度  蓝
（2）限制性内切酶（限制酶）  DNA连接酶
（3）转化作用  染色体的DNA  抗原-抗体杂交
（4）有丝分裂  桑椹胚或囊胚  内细胞团

点评：此题主要考查基因工程的原理和应用，胚胎工程等知识点，意在考查学生对基础知识的理解和综合运用能力．难度适中．