Question

10．尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用．请分析回答有关问题从土壤中分离分解尿素的细菌的有关问题．
（1）如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的依次是灭菌、为了让每一次划线的菌种来自上一次划线的末端．
（2）划线操作必须在酒精灯火焰附近进行，画线完成后将平板倒置，目的是：防止培养皿内壁上出现的冷凝水污染培养基．
（3）表是一种培养基配方（加蒸馏水定容到1000mL）

成分	KH2PO4	Na2HPO4	MgSO47H2O	葡萄糖	尿素	琼脂
含量	1.4g	2.1g	0.2g	10.0g	1.0g	15.0g

①（多选题）该培养基属于BD培养基．
A．液体       B．固体        C．鉴定       D．选择
②该培养基中，葡萄糖为微生物提供的营养要素是碳源．
③使用该培养基的目的是筛选出能够分解尿素的细菌．
④在培养基中加入酚红指示剂，可初步鉴定出该种细菌能分解尿素．
（4）（多选）在进行分离分解尿素细菌的实验中，A同学从培养基筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落．A同学的实验结果产生的原因可能有AB．
A．土样不同      B．培养基污染         C．没有设置对照．

Answer 1

分析 1、培养基的类型
（1）按物理性质分：

名称	特征	功能
固体培养基	外观显固体状态的培养基	主要用于微生物的分离、鉴定
液体培养基	呈液体状态的培养基	主要用于工业生产

（2）按功能分：

种类	制备方法	特征	用途
选择培养基	培养基中加入某种化学成分	根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率	加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
鉴别培养基	加入某种试剂或化学药品	依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计	鉴别和区分菌落相似的微生物伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌

2、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．

解答 解：（1）如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步灼烧接种环是为了防止杂菌污染，在每次划线之前都要灼烧接种环，目的时为了让每一次划线的菌种来自上一次划线的末端．
（2）划线操作必须在酒精灯火焰附近进行，为了防止培养皿内壁上出现的冷凝水污染培养基，画线完成后将平板倒置．
（3）①分析培养基的成分可知，琼脂作为凝固剂，因此该培养基为固体培养基；该培养基配方中只有尿素作为唯一氮源，因此从功能上来说，该培养基又是选择培养基．
②该培养基中，葡萄糖为微生物提供碳源．
③培养基中以尿素作为唯一氮源，因此使用该培养基的目的是筛选出能够分解尿素的细菌．
④在培养基中加入酚红指示剂，可初步鉴定出该种细菌能分解尿素．
（4）由题意知，该同学与其他同学获得的菌落数差异很大，可能的原因是采用的土样不同，培养基灭菌不彻底，培养基被污染，或者是实验过程中没有进行无菌操作等，该实验无需设置空白对照．
故答案为：
（1）灭菌    为了让每一次划线的菌种来自上一次划线的末端
（2）倒置     防止培养皿内壁上出现的冷凝水污染培养基
（3）①BD
②碳源
③筛选出能够分解尿素的细菌
④酚红
（4）AB

点评 本题主要考查微生物的实验室分离和培养，要求考生能够掌握微生物分离与纯化的方法，能够根据培养基的配方确定培养的类型，掌握尿素分解菌分离和鉴定的方法，再结合所学知识准确答题．