Question

如图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线．图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点．

据图回答：
（1）获得人乳铁蛋白基因的目前常用方法有

 

、利用PCR技术扩增目的基因和根据已知蛋白质中的氨基酸序列推知基因的脱氧核苷酸序列再进行化学合成．
（2）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用

 

限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因．筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含

 

的培养基上进行．
（3）人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达时RNA聚合酶识别和结合的位点是

 

，其合成的产物是

 

（添具体内容）．
（4）为检测牛基因组中是否含有人乳铁蛋白基因可采用

 

技术
（5）①过程的受体若是双子叶植物和裸子植物，则采用最多的方法是

 

．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：分析题图：图示是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线，包括基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、早期胚胎培养、胚胎移植等步骤，其中过程①是将重组质粒导入受体细胞；过程②需采用胚胎移植技术．

解答： 解：（1）获得人乳铁蛋白基因的目前常用方法：从基因组文库中获取目的基因、利用PCR技术扩增目的基因和根据已知蛋白质中的氨基酸序列推知基因的脱氧核苷酸序列再进行化学合成．
（2）外源DNA分子上含有限制酶BamHI、HindIII、SmaI的切割位点，其中限制酶SmaI的切割位点位于目的基因上，所以获取目的基因和构建基因表达载体时，应用限制酶HindⅢ和BamHⅠ．用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割质粒后，会破坏质粒上的四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含氨苄青霉素的培养基上进行．
（3）能让目的基因开始表达的是启动子，启动子是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列，是基因的一个组成部分，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度；其合成的产物是人乳铁蛋白基因转录产生的mRNA．
（4）为检测牛基因组中是否含有人乳铁蛋白基因可采用DNA分子杂交技术，一般检测目的基因是否表达里用抗原-抗体杂交的方法．
（5）过程①是将重组质粒导入受体细胞，受体若是双子叶植物和裸子植物，则采用最多的方法是农杆菌转化法．
故答案为：
（1）从基因组文库中获取目的基因
（2）HindⅢ和BamHⅠ氨苄青霉素
（3）启动子人乳铁蛋白基因转录产生的mRNA
（4）DNA分子杂交
（5）农杆菌转化法

点评：本题难度适中，属于考纲中识记、理解层次的要求，着重考查了基因工程的限制酶的作用特点、启动子的功能、目的基因导入植物细胞的方法等相关知识，要求考生具有一定的识图能力，并能识记相关基础知识．