Question

【题目】某地土壤中有一种有害的、难以降解的有机化合物A，研究人员从该地土壤中筛选获得了一种只能降解、利用化合物A的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品。请回答下列问题：

（1）实验室常用的灭菌方法有_____________、_____________和高压蒸汽灭菌。

（2）②中用于培养目的菌株的选择培养基中应加入化合物A作为唯一__________。

（3）测定②中活细菌的数量，常采用__________法。在某一次实验中，平板上菌落平均数为36个／平板，与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌菌落数较__________。在6个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品液0．1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178、175和191，则每毫升土壤样品中的细菌数量为__________。

（4）④作为对照，该细菌在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤的培养基的主要区别在于_____。

Answer 1

【答案】灼烧灭菌 干热灭菌 碳源 稀释涂布平板 少 1.7 5×108 ④的培养基中没有加入化合物A作为碳源，而⑤的培养基中加入了化合物A作为碳源

【解析】

本题考查微生物培养和筛选方法。微生物的培养需要在无菌条件下进行。常用灭菌方法如下：

1、灼烧灭菌，将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他的金属用具直接在酒精灯火焰的充分燃烧层燃烧，可以迅速的彻底地灭菌。

2、干热灭菌，将灭菌物品放入干热灭菌箱内在160-170度加热1-2小时可以达到灭菌的目的。

3、高压蒸汽灭菌将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌的方法。

4、实验室内常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。两种方法都可以获得单菌落，但后者还可以进行活菌计数。

（1）实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌它们分别适用于不同的实验器材。

（2）因为要筛选只能降解、利用化合物A的细菌，所以要求选择培养基中只加入化合物A作为唯一碳源。

（3）结合题干实验过程可知，活菌计数法通常采取了稀释涂布平板法。该方法与血球计数法相比结果偏小，因为后者把死的菌体也即入其中。在6个细菌培养基平板上接种并培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数只有156、178、175和191四个平板符合计数要求，所以每克土壤样品中的细菌数量=（156+178+191+175）÷4÷0.1×105=1.75×108个。

（4）④作为对照，该细菌在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤的培养基的主要区别在于④的培养基中没有加入化合物A作为碳源，而⑤的培养基中加入了化合物A作为碳源。用这种方法可以检验获得的菌种是否符合要求。