Question

【题目】基因表达载体的构建是基因工程的重要技术。下图甲表示以大肠杆菌为受体细胞的基因表达载体的构建过程，请回答以下问题：

（1）质粒中的复制原点是________________酶识别和结合的位点。

（2）为了筛选获得含有上图所示重组质粒的大肠杆菌，实验人员首先将经转化处理过的大肠杆菌接种在含_____________（抗生素）的培养基中，并出现菌落（图乙），然后用灭菌后的丝绒包上棉花制成的一枚“印章”，将图乙所示培养基上的菌落印到含__________（抗生素）的另一培养基上，培养后形成菌落（图丙）。图丙中，________（填“能正常生长繁殖”或“不能正常生长繁殖”）的菌落已导入含目的基因的重组质粒。

（3）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体。噬菌体载体与质粒载体相比,其优点是___________________________________。

（4）1967年，罗思和海林斯基发现细菌拟核DNA之外的质粒有自我复制能力，并可以在细菌细胞之间转移，这一发现对于当时基因工程技术的发展有什么促进作用？___________。

（5）若某DNA分子片段用两种限制酶酶切成不同长度的片段（结果如下表所示）。

酶	酶切结果（1kb=1000对碱基）
BamHI	四个片段：8.0kb，7.5kb，4.5kb，2.9kb
BglII	三个片段：13kb，6kb，3.9kb
BamHI+ BglII	六个片段：7.5kb，6kb，3.5kb，2.9kb，2kb，1kb

7.5kb、2.9kb和6kb三个片段中不存在BamHI和BglII两种酶的酶切位点，请根据上述酶切结果说明判断依据：_______________。

Answer 1

【答案】 DNA聚合 氨苄青霉素 四环素 不能正常生长繁殖 噬菌体载体能更有效地侵染受体细胞 (噬菌体载体的转化效率更高) 为基因转移找到了一种运载工具（质粒可以作为目的基因的运载工具） 7.5kb、2.9kb和6kb三个片段是两种限制酶单独酶切时可产生的片段

【解析】（1）质粒的化学本质为环状DNA，复制时DNA聚合酶识别、结合复制原点，启动DNA复制过程。

（2）据图可知，目的基因插入了四环素抗性基因中，破坏了四环素抗性基因，重组质粒上含有氨苄青霉素抗性基因，经转化处理过的大肠杆菌接种在含氨苄青霉素的图乙的培养基中，产生的菌落应是含有普通质粒或重组质粒的大肠杆菌形成的。用灭菌后的丝绒包上棉花制成的一枚“印章”，将图乙所示培养基上的菌落印到含四环素的图丙培养基中，不能正常生长、繁殖的菌落表明含有重组质粒，能生长的菌落表明含有普通质粒。

（3）噬菌体属于细菌性病毒，可专性侵染细菌，噬菌体载体与质粒载体相比, 能更有效地侵染受体细胞 (噬菌体载体的转化效率更高)。

（4）细菌拟核DNA之外的质粒有自我复制能力，并可以在细菌细胞之间转移，提示可以把质粒作为运载工具，实现目的基因的转移。

（5）该DNA分子被BamHI酶切后，可产生4个片段，说明该DNA分子上含有三个BamHI的酶切位点，同理可知该DNA分子上含有二个BglII的酶切位点，BamHI和 BglII共同作用，产生的六个片段中，7.5kb、2.9kb和6kb三个片段是两种限制酶单独酶切时可产生的片段，据此可知，7.5kb、2.9kb和6kb三个片段中不存在BamHI和BglII两种酶的酶切位点。