Question

13．下图是将人的生长激素基因导入细菌B内制造“工程菌”的示意图，所用载体为质粒A．已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌B以后，其上的基因能得到表达．请回答下列问题：

（1）基因工程的操作一般包括四个步骤：目的基因的获取；目的基因与运载体结合；目的基因的导入；目的基因的检测与表达．
（2）重组质粒通常是在体外完成，必须用到的工具酶为限制酶和DNA连接酶．
（3）目前把重组质粒导入受体细胞时，效率还不高；导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒，有的导入的是普通质粒A，只有少数导入的是重组质粒．此处可以通过如下步骤来鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒：a将得到的细菌涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，不能够生长的是导入质粒的细菌的细菌．b若把通过鉴定证明导入质粒的细菌放在含有四环素的培养基上培养，不能生长的是导入重组质粒的细菌的细菌．
（4）导入细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是什么？合成人的生长激素．
（5）如果限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G^↓GATCC-，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-^↓GATC-．在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来？为什么？能；因为具有相同的黏性末端．

Answer 1

分析 分析题图：图示表示将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的过程．质粒A上含有四环素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因，构建基因表达载体后，破环了质粒A的四环素抗性基因，但氨苄青霉素抗性基因正常，所以导入重组质粒或普通质粒的大肠杆菌都能抗氨苄青霉素，但导入重组质粒的大肠杆菌不能抗四环素．

解答 解：
（1）基因工程的操作一般包括四个步骤：目的基因的获取、目的基因与运载体结合、目的基因的导入、目的基因的检测与表达．
 （2）基因工程有三种工具：限制酶、DNA连接酶、运载体．运载体不是工具酶．因此重组质粒通常是在体外完成，必须用到的工具酶为限制酶和DNA连接酶．
（3）将得到的细菌涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的就是导入了普通质粒A或重组质粒，反之则没有．使用这种方法鉴别的原因是普通质粒和重组质粒均含有抗氨苄青霉素基因，其表达产物能分解青霉素．若把通过鉴定证明导入普通质粒A或重组质粒的细菌放在含有四环素的培养基上培养，由于普通质粒上有抗四环素基因，重组质粒上的该基因由于目的基因的插入而被破坏，因此培养基中的细菌有的能生长，有的不能生长．
（4）导入细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是合成人的生长激素．
（5）由于限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-^↓GATC-，因此目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端为：．限制性内切酶Ⅰ和限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点不同，但两种切割形成的黏性末端相同，因此可在DNA连接酶的作用下能连接起来．
故答案为：
（1）目的基因的获取   目的基因与运载体结合    目的基因的导入   目的基因的检测与表达
（2）限制酶和DNA连接酶
（3）导入质粒的细菌      导入重组质粒的细菌
（4）合成人的生长激素
（5）能，因为具有相同的黏性末端

点评 本题结合“工程菌”的制造过程，考查基因工程的应用，要求考生识记基因工程的基本操作步骤，能分析题图，明确目的基因插入质粒后会破坏质粒的四环素抗性基因，再对选项作出准确的判断，属于考纲识记和理解层次的考查．