Question

【题目】噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随噬菌体外壳蛋白的表达而表达，同时，外源蛋白或多肽随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。利用该技术可以获得单克隆抗体(最新技术）。请问答下列问题：

（1）传统单克隆抗体的获得需先对小鼠进行_______处理，整个过程中涉及的现代科学技术有________。

（2）外源DNA片段含_________个游离的磷酸。为了得到大量的外源DNA，可使用PCR技术进行体外扩增，合成引物________(填“需要”或“不需耍”)知道整个外源DNA序列，合成的引物间不能进行碱基互补配对的原因是________________。

（3）噬菌体展示技术获得的抗体还可用于定量检测抗原，如双抗体夹心法，具体原理如下图所示：

分析上图可知，固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，这是由于不同抗体可与同一抗原表面的______结合。该检测方法中，酶标抗体的作用是__________，可通过测定产物量来推测抗原量。

（4）试说说噬菌体展示技术可能的局限性:_______________________。

Answer 1

【答案】 注射特定的抗原蛋白(免疫） 动物细胞培养、动物细胞融合 2 不需要 它们的模板分别位于外源DNA的两端，而两端的模板序列并不能进行碱基互补配对 不同部位 与待测抗原结合，酶催化检测底物反应 不能展示对噬菌体或宿主细胞有毒的蛋白质，噬菌体的蛋白质无法被内质网和高尔基体等加工

【解析】试题本题以图文的形式考查了动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体的制备的相关知识，意在考查学生的识图、析图能力及运用所学知识解决问题的能力。噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随外壳蛋白的表达而表达，同时，外源蛋白随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。

（1）传统单克隆抗体的获得需从小鼠脾脏获取效应B细胞前需对小鼠进行注射特定抗原蛋白处理，整个过程中涉及的现代科学技术有动物细胞培养、动物细胞融合。

（2）每个DNA分子的每条单链上各有一个游离的磷酸基团，因此外源DNA片段含2个游离的磷酸。一般情况下，我们需要大量的某一基因的片段时，我们在基因的两端分别设计引物（一段一条），然后在体外，采用PCR的方法，用引物进行体外DNA复制，从而大量合成引物之间的基因。因此不需要知道整个外源DNA序列，只需要设计好引物，其余部分可通过碱基互补配对原则自动完成。由于引物的模板分别位于外源DNA的两端，而两端的模板序列并不能进行碱基互补配对，因此合成的引物间不能进行碱基互补配对。

（3）抗体与抗原的结合具有特异性，因此不同抗体可与同一抗原表面的不同部位结合。由于抗体具有特异性，因此该检测方法中，酶标抗体的作用是与待测抗原结合，酶催化检测底物反应，可通过测定产物量来推测抗原量。

（4）菌体展示技术可能的局限性：不能展示对噬菌体或宿主细胞有毒的蛋白质，噬菌体的蛋白质无法被内质网和高尔基体等加工。