Question

【题目】苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害．某学校科研兴趣小组准备依据如图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选出苯酚高效降解菌株．回答下列问题：

（1）甲图中苯酚降解菌的富集培养基应含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有_____．

（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_____．以达到获得苯酚高效降解菌的目的．应采用______方法来进行该菌种的计数与分离，统计的菌落数往往比活菌的实际数目要_____．

（3）制备平板培养基时除了需要水、碳源、氮源、无机盐和特殊营养物质外，还必须添加_____．培养基的灭菌方法为_____．

（4）乙图为连续划线法示意图，在该图中_____（填序号）区域最易获得单菌落．如需要长期保存该菌种，应采用甘油管藏的方法，保存温度为_____．

Answer 1

【答案】 蛋白胨 苯酚 增加（升高） 稀释涂布平板 低 琼脂（凝固剂） 高压蒸汽灭菌 ③﹣20℃

【解析】试题分析：微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。微生物常见的接种的方法有：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种、划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）培养基成分中的有机物均可以提供碳源，即蛋白胨、苯酚据可以作为碳源。

（2）分析实验可知，实验目的是筛选苯酚降解菌，因此将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐增加，以达到富集苯酚降解菌的目的。图甲中采用的是稀释涂布平板法，以便于菌落计数与分离，用这种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目要小，因为常常有两个或多个菌体连在一起生长繁殖而形成一个菌落。

（3）制备平板培养基是固体培养基，除了需要水、碳源、氮源、无机盐和特殊营养物质外，还必须添加琼脂作为凝固剂。培养基的灭菌方法为高压蒸汽灭菌法。

（4）图2为平板划线法，随着划线次数的增加，菌种进一步被稀释，因此图中③区域更易获得单菌落。长期保存该菌种，应采用甘油管藏的方法，保存温度为-20℃。