Question

【题目】回答下列（一）、（二）小题：

（一）回答与泡菜制作有关的问题：

(1)为了获得用于泡菜腌制的优良乳酸菌，通常将泡菜汁稀释后涂布在MRS乳酸菌专用培养基上进行________分离，然后将其扩大培养，并进行特性鉴定。在进行特性鉴定时，必需进行耐酸实验、耐高温实验和________实验等，从而选出优势菌株。下图是四个菌株在白菜汁培养基中的生长曲线，比较适合泡菜腌制的菌株是________。

(2)在泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类、亚硝酸盐等。腌制初期大量繁殖的微生物是________，醇类主要是由它进行________产生的，随后泡菜中PH开始下降，其它微生物生长受到抑制。

(3)为测定腌制的泡菜中亚硝酸盐含量，取腌制的泡菜和少量泡菜汤，在匀浆机中打成匀浆，过滤洗涤得到样品溶液，先除去蛋白质、脂质等，然后与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，再与________偶联，形成紫红色产物，然后用光程1cm的比色杯测定光密度值。如果制作标准曲线时的比色杯光程大于样液的比色杯光程，测得的样液中亚硝酸盐含量________（偏大、偏小、无影响）。

（二）草甘膦是一种常用非选择性除草剂，一种农杆菌中的基因E编码抗草甘膦的酶，利用基因工程技术将基因E转入大豆中，以提高大豆对草甘膦的忍耐能力，请回答：

(1)从农杆菌中提取含有基因E的DNA，用限制性核酸内切酶分别切割含基因E的DNA和农杆菌的________，然后用DNA连接酶连接，形成重组DNA分子并导入农杆菌。为了提高重组DNA形成的效率，除了考虑目的基因和载体的质量与浓度外，还需要考虑的主要因素有________。

(2)将________后的大豆胚尖浸泡在含有E基因的农杆菌溶液中，一段时间后取出并转移到加有适当配比生长调节剂的培养基上，脱分化形成愈伤组织，为提高形成愈伤组织能力，可以对大豆胚尖进行适当的________刺激处理。

(3)除了用(2)中方法得到转基因大豆外，也可以将上述愈伤组织进行液体悬浮培养，分散成________丰富、液泡小而细胞核大的单细胞，这种单细胞依次经细胞团、球形胚、心形胚和________，最后再生出完整的植株。

(4)为判断本研究是否达到预期目的，可比较转基因大豆和非转基因大豆的________性状。

Answer 1

【答案】单菌落 耐盐 D 假丝酵母菌 厌氧呼吸 N-1-萘基乙二胺 偏小 Ti质粒 粘性末端的情况、DNA连接酶活性 消毒 创伤 细胞质 胚状体 耐草甘膦

【解析】

（一）1、泡菜制作的原理是乳酸菌进行无氧呼吸产生乳酸，为了防止微生物污染，制作泡菜过程中应进行无菌操作；泡菜盐水的浓度应该是清水与盐的比例应为4：1，如果盐浓度过高会抑制乳酸菌发酵，造成咸而不酸，盐浓度过低不足以抑制微生物生长，造成杂菌污染；为了缩短制作时间可以加入陈泡菜水，以增加乳酸菌数量；微生物培养所用的培养基至少包括碳源、氮源、水、无机盐等。

2、测定亚硝酸盐含量时亚硝酸盐在盐酸酸化的条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，与N﹣1﹣萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，用比色法可以推测样品中的亚硝酸盐的含量。

（二）1、农杆菌转化法的原理：农杆菌中的Ti质粒上的T﹣DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T﹣DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上。

2、植物组织培养就是在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。

（一）（1）为了获得用于泡菜腌制的优良乳酸菌，通常将泡菜汁稀释后涂布在MRS乳酸菌专用培养基上进行单菌落分离，然后将其扩大培养，并进行特性鉴定。在进行特性鉴定时，必需进行耐酸实验、耐高温实验和耐盐实验等，从而选出优势菌株。由曲线可知D前期数量较多，后期下降较快，所以适合泡菜腌制。

（2）在泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类、亚硝酸盐等。腌制初期大量繁殖的微生物是假丝酵母菌，醇类主要是由它进行厌氧呼吸产生的，随后泡菜中PH开始下降，其它微生物生长受到抑制。

（3）为测定腌制的泡菜中亚硝酸盐含量，取腌制的泡菜和少量泡菜汤，在匀浆机中打成匀浆，过滤洗涤得到样品溶液，先除去蛋白质、脂质等，然后与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，再与N﹣1﹣萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物，然后用光程1cm的比色杯测定光密度值。如果制作标准曲线时的比色杯光程大于样液的比色杯光程，测得的样液中亚硝酸盐含量偏小。

（二）

（1）农杆菌中的Ti质粒上的T﹣DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据农杆菌的这一特点，从农杆菌中提取含有基因E的DNA，用限制性核酸内切酶分别切割含基因E的DNA和农杆菌的Ti质粒，然后用DNA连接酶连接，形成重组DNA分子并导入农杆菌。为了提高重组DNA形成的效率，除了考虑目的基因和载体的质量与浓度外，还需要考虑的主要因素有黏性末端的情况、DNA连接酶活性。

（2）将消毒后的大豆胚尖浸泡在含有E基因的农杆菌溶液中，一段时间后取出并转移到加有适当配比生长调节剂的培养基上，脱分化形成愈伤组织，为提高形成愈伤组织能力，可以对大豆胚尖进行适当的创伤刺激处理。

（3）除了用（2）中方法得到转基因大豆外，也可以将上述愈伤组织进行液体悬浮培养，分散成单细胞，这种单细胞的细胞质丰富、液泡小而细胞核大；这种单细胞依次经细胞团、球形胚、心形胚和胚状体，最后再生出完整的植株。

（4）该研究的目的是提高大豆对草甘膦的忍耐能力，因此为判断本研究是否达到预期目的，可比较转基因大豆和非转基因大豆的耐草甘膦性状。