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    回答下列基因工程的有关问题．

    （1）步骤①和②中常用的工具酶是
     
    和
     
    ．
    （2）质粒的基本组成单位是
     
    ．上图中质粒上有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因两个标记基因，经过①和②步骤后，有些质粒上的
     
    基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒，由于目的基因的分隔使得该抗性基因失活．
    （3）步骤③是
     
    的过程，为了促进该过程，应该用
     
    处理大肠杆菌．
    （4）步骤④：将锥形瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，能在C中生长的大肠杆菌有
     
    种．
    （5）步骤⑤：用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示．含目的基因的菌落位于
     
    （填D或E）上，请在图中相应的位置上圈出来（标在答题纸相应位置）．
    考点：基因工程的原理及技术
    专题：
    分析：步骤①是将环状质粒切割开，步骤②是将目的基因与质粒连接，步骤③是将目的基因导入受体细胞，④是对大肠杆菌进行培养和筛选，⑤是用选择培养基进一步筛选菌落．
    解答： 解：（1）用限制酶将质粒切割开形成黏性末端，用DNA连接酶将目的基因与质粒连接起来．
    （2）质粒的实质是环状DNA，基本组成单位是脱氧核苷酸；由图中限制酶切割位置可知，目的基因插入的位置是氨苄青霉素抗性基因中．
    （3）步骤③是基因工程第三步：将目的基因导入大肠杆菌（受体细胞）．为了促进该过程，用Ca2+处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞．
    （4）培养基C是选择培养基，培养基中有四环素，专一筛选含四环素抗性基因的大肠杆菌，能在C中生长的大肠杆菌有两种，分别是含有抗四环素基因、同时抗四环素基因和含氨苄青霉素基因的大肠杆菌．
    （5）D培养基中大肠杆菌能抵抗四环素和含氨苄青霉素，而E中只抗一种四环素，所以在E中对应区域（D中没有菌落的部位），该处为转基因大肠杆菌，结果如图：

    故答案为：
    （1）限制酶          DNA连接酶
    （2）脱氧核苷酸      氨苄青霉素抗性
    （3）将重组质粒（目的基因）导入大肠杆 菌（受体细胞）      Ca2+
    （4）2
    （5）E    如下图所示（两点全圈出给分）．
    点评：本题考查转基因大肠杆菌培养和筛选过程，意在考查学生的识图和理解能力，属于中档题．
    练习册系列答案
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    （1）上述研究过程所用限制酶主要从
     
    中分离纯化出来，其作用的化学键是
     
    ．PCR扩增DNA片段时利用
     
    解开双链．
    （2）图示基因突变属于碱基对的
     
    ，据图分析，胎儿的基因型是
     
    （基因用A、a表示）．患儿患病可能的原因是
     
    的原始生殖细胞通过减数分裂产生配子时发生了基因突变；从基因表达角度分析，其患病的原因是
     
    ．
    （3）若此家庭中患儿为男性，成年后与一表现型正常女子婚配（父母正常但有一个患地中海贫血症的弟弟）．请预测他们婚后生育一个患此病男孩的概率是
     
    ．
    （4）研究发现，β--珠蛋白基因其它碱基部位的突变还会造成β-珠蛋白再生障碍性贫血，已发现第17对染色体的某基因座上至少有15种基因种类，这说明基因突变具有
     
    特点．同时还发现许多中国人的第17个碱基A突变成T的相当普遍，但并未引起β--珠蛋白再生障碍性贫血，其原因是
     
    ．

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    C、模板DNA、信使RNA、质粒、受体细胞
    D、工具酶、目的基因、运载体、受体细胞

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