Question

12．基因剔除是指用一定技术将待剔除的目的基因中插入一外源基因致使目的基因失活，再将其导入受体细胞并取代原有的正常基因，进而获得表型改变的基因剔除个体．近年来科研工作者通过基因剔除技术已经获得数百种基因定位缺陷小鼠．
（1）该项技术的原理是基因重组，最核心环节是基因表达载体的构建，待剔除的目的基因中插入的外源基因常起筛选作用，即标记基因基因．
（2）获得基因剔除小鼠时，常用ES细胞做受体细胞．ES细胞是由原始性腺或囊胚中分离出来的一类细胞，在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显，在功能上具有具有发育全能性．
（3）通过选择培养获得的重组ES细胞，其一对同源染色体上只有一条染色体上的等位基因被剔除，得到的小鼠是该基因缺失杂合体．若要获得真正的基因剔除小鼠，需要将该基因缺失杂合体雌雄小鼠进行杂交，从子代中选出隐性纯合体，即为基因剔除小鼠．

Answer 1

分析 1、哺乳动物的胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或从原始性腺中分离出来．
2、具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞．另外，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造．
3、胚胎干细胞可用于治疗人类的某些顽症，如帕金森综合症．还可培育出人造器官，解决目前临床上存在的供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题．

解答 解：（1）据题中信息可知，该项技术是基因工程，运用的原理是基因重组，最核心环节是基因表达载体的构建．在靶基因中插入neo^R基因的目的是使靶基因失活和用于基因敲除细胞的筛选，是标记基因．
（2）胚胎干细胞（ES）可由原始性腺或囊胚的分离培养获得内细胞团细胞．ES细胞在形态上表现的特点为体积小，细胞核大，核仁明显；ES细胞功能上具有发育全能性，有望在对人类ES细胞进行定向诱导分化后用于疾病的细胞治疗．
（3）若要获得真正的基因剔除小鼠，需要将该基因缺失杂合体雌雄小鼠进行杂交，从子代中选出隐性纯合体，即为基因剔除小鼠．
故答案为：
（1）基因重组   基因表达载体的构建   标记基因
（2）原始性腺或囊胚    体积小，细胞核大，核仁明显     具有发育全能性
（3）该基因缺失杂合体雌雄小鼠    隐性纯合体

点评 本题以基因治疗的流程图为载体，考查了基因工程、细胞工程以及胚胎工程等方面的知识，难度适中．考生要能够识记细胞核移植的过程；识记囊胚包括内细胞团和滋养层两部分；明确基因工程中质粒和目的基因需要利用同种限制酶进行切割；掌握目的基因检测和鉴定的一般方法等．