Question

【题目】基因工程操作步骤中，需要从受体细胞群中筛选出已获得目的基因的细胞，如图中①﹣③示一种筛选方法的过程．pBR322质粒含有两个抗性基因，分别是Ampr（氨苄青霉素）抗性基因和Tetr（四环素）抗性基因，其中在Tetr抗性基因上有下列目的基因的插入位点（插入将导致Tetr抗性基因功能性失活），请回答：

（1）如图中①过程所需的酶除DNA连接酶以外，需要的限制酶是_____．

（2）经过①过程，pBR322质粒可能出现的两种结果：A1是_____ A2是_____．

（3）经过导入过程，B（受体细菌）可能出现结果是_____

A．导入未成功的细菌 B．含A1的细菌

C．含A2的细菌 D．含A1和A2的细菌

（4）②过程表示用含四环素（使细胞停止生长，但不致死）和环丝氨酸（使生长的细胞致死）的培养基中培养细菌甲，则培养结果C表示在培养基中可能存活的细菌包括_____。

（5）若要进一步筛选出符合要求的受体细胞D，则③过程需要做的处理是（请参照过程②的方法）_____。

Answer 1

【答案】EcoRVSal1 重组质粒 没有发生重组的质粒 ABCD 导入不成功的细菌和导入了重组质粒的细菌 将存活的细菌转移到含氨苄青霉素的培养基上培养

【解析】

（1）①过程为构建基因表达载体，需要对质粒进行切割和与目的基因相连接，所以要用限制酶和DNA连接酶；据图分析可知，限制酶可选EcoRVSal1。
（2）①为构建基因表达载体，会出现将目的基因与质粒成功重组和重组失败的结果，所以ρBR322会出现两种结果，即：重组质粒和未重组的质粒。
（3）经过导入过程，B（受体细菌）细菌有4类情况：含有不是重组的质粒、含有重组质粒的、不含有质粒的、同时含有重组和不重组的质粒，故选ABCD。
（4）细菌有三类：含有质粒（不是重组的）、含有重组质粒的、不含有质粒的。Tet抗性基因上有目的基因的插入位点，所以重组质粒上没有Tet抗性基因，成功导入重组质粒的细菌和没有导入的细菌均不含Tet抗性基因，即都不抗四环素，细胞可以在含四环素培养基上存活但不生长，而环丝氨酸会使生长的细胞致死，对不生长的细胞无影响，但会使含有抗四环素的细菌致死，所以C中成活的细菌有导入不成功的细菌和导入重组质粒的细菌。
（5）经过C后，现需要含重组质粒的细菌，含重组质粒的细菌含有Amp抗性基因，可在氨卡青霉素培养基中生长，而导入不成功的细菌会在其中死亡，所以可将经过C存活的细菌转入含氨卡青霉素的培养基中培养。