[题目]菊花是重要观赏花卉.为增加菊花花色类型.某科研小组从植物A的基因文库中选出花色基因C(图1).并将其与质粒(图2)重组.再借助农杆菌导入菊花中.请回答下列问题:(1)利用PCR技术可获赠花色基因C.扩增前需根据花色基因C的一段核苷酸序列合成 .便于扩增时热稳定DNA聚合酶延伸DNA子链.(2)构建基因表达载体时.需用EcoRⅠ分别处理C� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

【题目】菊花是重要观赏花卉，为增加菊花花色类型，某科研小组从植物A的基因文库中选出花色基因C（图1），并将其与质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。请回答下列问题：

（1）利用PCR技术可获赠花色基因C，扩增前需根据花色基因C的一段核苷酸序列合成_____________，便于扩增时热稳定DNA聚合酶延伸DNA子链。

（2）构建基因表达载体时，需用EcoRⅠ分别处理C基因和质粒而不用BamHⅠ的理由是_____________；当C基因和质粒连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是_____________。

（3）用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织时，需在培养基中添加酚类物质，其目的是_____________；C基因的遗传特性能在菊花体内维持和表达的关键是_____________；为筛选出成功转化的菊花细胞，应在筛选培养基中添加_____________。

（4）经检测部分菊花植株的基因组中已有C基因，但没有发现基因C对应花色，为分析原因，可从分子水平上采用_____________技术检测C基因是否转录。

【答案】引物（一对引物） EcoRⅠ可切割C基因两端和质粒，产生相同黏性末端便于构建重组质粒，而C基因两端无BamHⅠ的识别序列磷酸二酯键吸引农杆菌移向菊花细胞，有利于C基因成功转化目的基因插入到了菊花细胞的染色体DNA上潮霉素分子杂交

【解析】试题分析：据图分析，图1中C基因（目的基因）两侧的限制酶是EcoRⅠ；图2表示质粒，含有标记基因、启动子、终止子、EcoRⅠ和BamHⅠ限制酶切割位点。

（1）利用PCR技术扩增C基因（目的基因）时，首先要根据目的基因的核苷酸序列合成一对引物，便于扩增时热稳定DNA聚合酶延伸DNA子链。

（2）根据以上分析可知，EcoRⅠ可切割C基因两端和质粒，产生相同黏性末端便于构建重组质粒，而C基因两端无BamHⅠ的识别序列，因此构建基因表达载体时，需用EcoRⅠ分别处理C基因和质粒而不用BamHⅠ。DNA连接酶连接目的基因和质粒之间的粘性末端，形成的化学键是磷酸二酯键。

（3）用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织时，需在培养基中添加酚类物质，以吸引农杆菌移向菊花细胞，有利于C基因成功转化；C基因的遗传特性能在菊花体内维持和表达的关键是目的基因插入到了菊花细胞的染色体DNA上；图示质粒上的标记基因是潮霉素抗性基因，因此为筛选出成功转化的菊花细胞，应在筛选培养基中添加潮霉素。

（4）C基因表达的产物是mRNA，可以利用分子杂交法进行检测。

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