胰岛素是治疗糖尿病的特效药.现在常用基因工程的方法高效率地生产.流程大致如图:(1)要获得人胰岛素mRNA的人体某组织细胞是胰岛B细胞．(2)图中3种限制酶PstⅠ.EcoRⅠ.Hind III切割质粒的位点已用箭头标出．试问图中②③④过程用到的酶依次是逆转录酶.限制酶PstⅠ.DNA连接酶．(3)过程⑤的实际操作中.可能没导入质粒.也可能导入的是� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

13．胰岛素是治疗糖尿病的特效药，现在常用基因工程的方法高效率地生产，流程大致如图：

（1）要获得人胰岛素mRNA的人体某组织细胞是胰岛B细胞．
（2）图中3种限制酶PstⅠ、EcoRⅠ、Hind III切割质粒的位点已用箭头标出．试问图中②③④过程用到的酶依次是逆转录酶、限制酶PstⅠ、DNA连接酶．
（3）过程⑤的实际操作中，可能没导入质粒，也可能导入的是不含目的基因的普通质粒，只有一部分导入的是重组质粒．根据培养基乙和丙中菌落判断，b和f菌落的大肠杆菌中导入的是重组质粒，从功能上看这是一种选择培养基．
（4）制备微生物培养基的一般操作顺序是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板．灭菌的常用方法是高压蒸汽灭菌．
（5）目的菌落的纯化培养时最常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法．

分析分析题图：①是从人体某组织中获取胰岛素mRNA，②是逆转录过程，③是采用限制酶切割外源DNA获得目的基因，④是基因表达载体的构建过程，⑤是将目的基因导入受体细胞．

解答解：（1）胰岛素基因只在胰岛B细胞中表达，因此要获得人胰岛素mRNA的人体某组织细胞是胰岛B细胞．
（2）②为逆转录过程，该过程需要逆转录酶的催化；③表示采用限制酶PstⅠ切割外源DNA获得目的基因；④表示采用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA．
（3）构建基因表达载体时，青霉素抗性基因被破坏，而四环素抗性基因完好，因此导入重组质粒的大肠杆菌能抗四环素，但不能抗青霉素．根据培养基乙和丙中菌落判断，b和f 菌落的大肠杆菌中导入的是重组质粒，从功能上看这是一种选择培养基．
（4）制备微生物培养基的一般操作顺序是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板．对培养基灭菌常用高压蒸汽灭菌．
（5）目的菌落的纯化培养时最常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法．
故答案为：
（1）胰岛B细胞
（2）逆转录酶     限制酶PstⅠDNA连接酶
（3）b和f      选择
（4）溶化      高压蒸汽灭菌
（5）平板划线法     稀释涂布平板法

点评本题结合图解，考查基因工程、微生物的分离和培养，要求考生识记基因工程的概念、原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节；识记微生物分离和培养的过程，常用的接种方法等，能结合所学的知识准确答题．

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