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    20．埃博拉病毒是一种RNA病毒，埃博拉病毒蛋白VP40在侵染过程中起着重要的作用，科学家构建重组VP40蛋白表达载体，将表达载体导入受体细胞，获重组VP40蛋白，并将该蛋白注入小鼠体内，制备抗VP40蛋白单克隆抗体，过程如图所示．

    （1）过程①表示逆转录．
    （2）pFastacl质粒上面至少要有EcoRⅠ、PstⅠ等限制酶切位点．
    （3）过程②中是利用抗原-抗体杂交技术诊断编码VP40是否翻译．
    （4）过程③筛选出的X是指能产生VP40蛋白抗体的杂交瘤细胞．
    （5）抗VP40蛋白单克隆抗体具有纯度高、特异性强特点，在埃博拉病毒感染早期诊断中发挥重要作用．

    分析 1、图示过程中，①表示逆转录过程，②表示利用抗原-抗体杂交技术检测目的基因是否表达，③表示筛选出的X即指能产生VP40蛋白抗体的杂交瘤细胞的过程．
    PCR技术的过程：高温变性、低温复性、中温延伸．条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）．
    2、获得目的基因的方法：①从基因文库中获取  ②利用PCR技术扩增  ③人工合成（化学合成）．原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成．
    3、DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．
    4、目的基因的检测与鉴定，常用基因探针--用放射性同位素（或荧光分子）标记的含有目的基因DNA片段．Ⅰ、分子水平上的检测 ①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术Ⅱ、个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

    解答 解：（1）据图示可知，过程①为以RNA为模板，形成DNA的过程，故表示逆转录过程．
    （2）由于目的基因一侧为EcoR限制酶切位点，另一侧为PstⅠ限制酶切位点，故pFastacl质粒上面至少要有 EcoRⅠ、PstⅠ等限制酶切位点．
    （3）若检测是否翻译出相应的蛋白质VP40需利用抗原-抗体杂交技术看是否出现了杂交带．
    （4）过程③筛选出的X应既能产生相应抗体，又能无限增殖，即指能产生VP40蛋白抗体的杂交瘤细胞．
    （5）与普通抗体相比较，抗VP40蛋白单克隆抗体具有纯度高、特异性强特点，在埃博拉病毒感染早期诊断中发挥重要作用．
    故答案为：
    （1）逆转录 
    （2）EcoRⅠ、PstⅠ
    （3）抗原-抗体杂交
    （4）能产生VP40蛋白抗体的杂交瘤细胞 
    （5）纯度高、特异性强

    点评 本题难度不大，综合性较强，考查了基因工程、单克隆抗体的制备等知识，要求考生具有扎实的基础知识，并构建一定的知识网络．

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