(1)稀释菌原液：为确定合适的稀释倍数，小组成员取1 mL菌原液进行如下图所示的操作，在统计菌落时，发现平板上的平均菌落数为40个，则每毫升菌原液中的细菌数大约为________个。

(2)培养基的准备：在对培养基进行高压蒸汽灭菌的过程中，完成加水、装锅、加热排气、保温保压适当时间后，切断热源，让灭菌锅内温度自然下降，________，打开排气阀，旋开固定螺栓，开盖，才可以取出灭菌的培养基等物品。待培养基冷却至50℃左右时倒平板，在培养基凝固之前加入灭菌的刚果红，从功能上来看，该培养基属于________培养基，培养基中碳源主要是________。　

(3)接种与观察：在无菌条件下，用________取0.1 mL稀释后的菌悬液进行图1中________所示的操作，室温放置2～3分钟后倒置于恒温箱中培养，室温放置2～3分钟的目的是__________________。培养过程中定期观察菌落特征和透明圈的大小，图2中D/d的值越________，表示该菌对纤维素分解能力越强。

（1）以Bt毒蛋白为有效成分的农药长期使用，会导致害虫种群____，使药效减弱直至丧失，无法在生产中继续使用。

（2）以家蚕为材料，研究昆虫抗药性遗传特性。测定生命力大致相同的多品种家蚕幼虫致死50%的Bt浓度（LC50），结果如下：

1研究人员欲选择敏感型和抗药型家蚕为亲本进行杂交实验，据上表结果，最好选择家蚕品种是_______________。

②杂交实验及结果如下表：

实验一和实验二的结果表明，家蚕抗药型是由位于____________染色体上的____性基因控制的；实验____的结果表明，F1产生两种配子且比例为1：1

（3）Bt毒蛋白与家蚕幼虫的中肠细胞特异性受体结合，使细胞膜穿孔，细胞裂解，幼虫死亡。为从分子水平上阐明家蚕产生抗药性的原因，研究人员从实验一亲本________________细胞中提取总RNA，获取cDNA，测定亲本受体基因碱基序列如图。

从分子水平推测家蚕抗药性产生的原是敏感型受体基因中插入3个碱基对，导致____（填写变异类型），进而在受体蛋白中插入一个氨基酸（酪氨酸），受体蛋白结构改变，使受体不能与Bt毒蛋白结合而产生抗药性。

（4）依据Bt受体基因设计的靶向sgRNA，可以与限制酶Cas9结合，定点切除受体基因的39个核苷酸。sgRNA和Cas9mRNA的混合物注射到____型家蚕受精卵中，若其发育成的家蚕幼虫表现为________，则进一步证明上述推测成立。

（5）基因编辑技术能精确靶向修饰生物体基因组特定位点，人为改造生物体的遗传信息。请从利或弊某一方面说明该技术的应用是一把“双刃剑”： ____。

A.当体温低于正常值时，正常人体冷敏神经元的放电频率一定高于热敏神经元的放电频率

B.当人体处于寒冷环境时，通过神经--体液调节，减少散热、增加产热，使体温恢复至正常

C.若人体感染流感病毒后体温持续偏高，点 S 将右移

D.正常人体处于炎热环境中的散热量大于在寒冷环境的中散热量

（1）在进行细胞培养之前，要对取自转基因奶牛的组织进行分离，形成单个细胞，这 一过程中需要利用_____酶处理，不能用纤维素酶与果胶酶的原因是_________________。

（2）形成重组细胞时应选用_________期的卵母细胞，去掉其细胞核的原因是____________。

（3）如果重组细胞为贴附性细胞，则在进行原代培养时，会表现出_____和_____等 特 点 。

（4）重组细胞在培养液中培养成的重组胚胎移入受体母牛体内会生出与供体奶牛遗传性状大致相同的犊牛，但某些性状上也会有差异，原因是__________________________________；__________________________________。

（5）上图中所示的生物技术整体被称为_____。转基因奶牛的克隆成功，说明了动物_____具有全能性。

（1）在生物体内，抗体是由________细胞分泌的，该细胞可以来自____________增殖分化。

（2）传统方法获取抗体时，需要将相应的抗原反复注射到动物体内，从动物的血清中分离。显然，这种方法产生的抗体量和纯度等都很低特异性差，单克隆抗体的出现，克服了传统抗体的不足，单克隆抗体是指________________。

（3）天然的抗体左右两个V区结构完全相同，只能结合相同的抗原。通过一定技术手段可以得到双功能抗体(又叫双特异性抗体)，它的两个V区能结合不同的抗原。制备双功能抗体的基本方法如下：将能分泌抗体1的杂交瘤细胞(A细胞)与能分泌抗体2的淋巴细胞(B细胞)进行融合，形成可分泌两种亲代抗体和杂种抗体的杂种—杂交瘤细胞(A—B)。细胞融合时需要用_______________、聚乙二醇或电激等诱导，融合后总共应该有______________种细胞(最多考虑两两融合)。

（4）双功能抗体在癌症治疗中可作为“生物导弹”：用其中一个V区识别癌细胞表面_________，用另一个V区将T细胞等杀伤细胞定向带到癌细胞所在的位置，这里，T细胞对癌细胞的攻击属于____免疫。

（5）细胞融合方法得到的双功能抗体，只是将两个不同抗体的V区集中到了一个抗体上，人们无法改变V区的结构。通过____技术，可以对双功能抗体的V区进行设计改造，使其更适合人类的需要。这种改造，最终还必须通过对DNA分子的改造来完成。

（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的_____。小鼠体细胞体外培养时， 所需气体主要是 O2 和 CO2，其中 CO2 的作用是维持培养液（基）的_____。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到_________期时，可从其内细胞团分离出 ES 细胞。体外培养条件下，ES 细胞在_____细胞上，能够维持只增殖不分化的状态。

（3）步骤③中，需要构建含有 Rag2 基因的表达载体。可以根据 Rag2 基因的__________设计引物，利用 PCR 技术扩增 Rag2 基因片段。PCR 过程需要经过多次循环，每一个循环包括：加热变性→冷却复性→_____，其中冷却复性的目的_________。用 HindⅢ和 PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得 Rag2 基因片段。为将该片段 直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有_____酶的酶切位点。

（4）为检测 Rag2 基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的_____，用_______________的抗体进行杂交实验。

（1）根据图甲分析，要获得最大持续捕捞量，捕捞后大黄鱼种群数量应处于__________点。用标志重捕法调查大黄鱼种群密度时，若标记个体更易于被捕食，则种群密度的估计值__________（填“偏高”“偏低”或“不变”）。

（2）海洋鱼类生活在不同的水层，这体现了生物群落的________结构。新建码头的桩柱表面很快被细菌附着，随后依次出现硅藻、藤壶、牡牡蛎等，该过程称为_____________。

（3）图乙表示某海域能量流动简图，A、B、C、D表示生态系统的组成成分。图中________和_________（填字母）在碳循环过程中起着关键作用；能量在第一营养级和第二营养级之间的传递效率为___________。

（4）海洋会受到石油、工业废水、生活污水等污染。如果污染超过海洋生态系统的________________，海洋生态系统就很难恢复到原来的状态。

（1）启动子的基本组成单位是____，终止子的功能是______________________。

（2）过程①的场所是____，过程①和过程②是____（同时/先后）进行的。

（3）图示表明，当细胞中缺乏足够的rRNA分子时，核糖体蛋白RP1能与mRNA分子上的RBS位点结合，从而导致mRNA____________________，终止核糖体蛋白的合成。这种调节机制既能保证细胞内rRNA与核糖体在数量上的平衡，又可以____________________。

（4）大豆中的一种成分——染料木黄酮因能抑制rRNA形成而成为抗癌药物的成分，试结合题中信息，分析染料木黄酮抗癌的机理：

①该物质（染料木黄酮）可以抑制____的形成；

②____，进而降低蛋白质合成速率，抑制癌细胞的生长、增殖。

（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有_____（答出两点即可），而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。

（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，_________ 的细胞是不能区分的，其原因是二者均不含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长；并且含有______________的细胞也是不能区分的，其原因是________。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有_____的固体培养基。

（3）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其 DNA 复制所需的原料来自于___________。

A.①是纤维素酶和果胶酶，②是融合的原生质体

B.②到③过程中高尔基体活动明显增强

C.将愈伤组织包埋在人工种皮中，就形成了人工种子

D.④长成的植株需要选择的原因是有耐盐高产和耐盐不高产两种