38. (广东A卷)(10分)生物技术实践

(1)商品化植酸酶主要来自微生物。在产酶菌株筛选过程中，常在基本培养基中添加不溶于水的植酸钙制成固体平板，植酸钙被植酸酶分解后可在平板上产生 　　　　　　　　，可根据其大小选择目的菌株，所得菌株需要进一步测定植酸酶活性。活性测定可以植酸钠作为底物，活性可用一定条件下单位时间　　　 表示。

(2)利用上述所得菌株制备植酸酶的流程如下图

Ⅰ中的主要成分为　　　 ；Ⅱ中包含多种酸酶等多种蛋白质。请写出一种纯化得到植酸酶的方法及其依据。

(3)为建设基因工程菌，可用PCR等技术从上述菌株中克隆植酸酶基因。PCR反应包含多次循环，每次循环包括三步：　　　 。反应过程中打开模板DNA双链的方法是　　　 。

23．(江苏多选)下列关于DNA和蛋白质提取与分离实验的叙述，正确的有

　 A．提取细胞中的DNA和蛋白质都需用蒸馏水涨破细胞

　 B．用不同浓度NaCl溶液反复溶解与析出DNA可去除蛋白质

C．蛋白质提取和分离过程中进行透析可去除溶液中的DNA

D．蛋白质和DNA都可以用电泳的方法进行分离纯化

31．(江苏)(6分)酶解法制备原生质体的原理是利用酶溶液对细胞壁成分的降解作用。蜗牛酶液从蜗牛(以植物为食)消化腺中提取；果胶酶、纤维素酶从微生物中提取。为了研究不同酶液的酶解效果，某实验小组取无菌烟草幼叶，切成相同大小的小片，等量放入6支试管中，试剂用量和实验结果列于下表。请回答有关问题。

(注：“+”越多表示绿色越深，“一”表示颜色无显著变化)

(1)实验过程中，需要轻摇试管，其目的是▲ 　，使原生质体从叶小片中游离出来，以便观察悬浮液绿色的深浅。

(2)从绿色的深浅可推测：蜗牛酶液酶解效果最好，原因是蜗牛酶液含有 　▲ 　等多种酶。该实验中▲ 　是空白对照组，其设置意义是▲ 　。

(3)用网筛过滤原生质体到离心管内，离心后收集沉淀物，并用 　▲ 洗涤。

(4)原生质体是否符合要求还需进行检验，其检验的方法是 　▲ 。

答案：(6分)(1)为了使细胞壁与酶充分接触，提高酶解效果

　 (2)果胶酶和纤维素酶I、Ⅱ、Ⅲ排除无关变量的干扰　 (3)等渗溶液

　 (4)低渗涨破法

　专题五DNA和蛋白质技术

32、答案：(1)　

(2)②混匀，　37℃　恒温水浴一段时间；③取出试管，分别加入适量的斐林试剂，混匀，沸水浴一段时间；④观察实验现象并记录实验结果。　

(3)含有蔗糖和淀粉酶溶液的试管(试管甲)，以及含有淀粉和淀粉酶溶液的试管(试管乙)中出现砖红色沉淀，其他试管中不出现砖红色沉淀；(4)(哺乳动物的蔗糖酶和淀粉酶)酶的催化作用具有专一性；(5)　20℃　低于酶的最适温度，酶活性低，水解产生的还原糖少。

31(理综1卷)(10分)

桃果实成熟后，如果软化快，耐贮运性就会差。下图表示常温下A、B两个品种桃果成熟后硬度等变化的实验结果。

据图回答：

(1)该实验结果显示桃果实成熟后硬度降低，其硬度降低与细胞壁中的　　　　　　　　

降解有关，该物质的降解与　　　　　　　　　 的活性变化有关，也与细胞壁中的　　　　　

降解有关，该物质的降解与　　 　　　　　　　　的活性变化有关。

(2)A、B品种中耐贮运的品种是　　　　　　 。

(3)依据该实验结果推测，桃果实采摘后减缓变软的保存办法应该是　　　　　　　　　　　 ，因为　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

(4)采摘后若要促使果实提前成熟，科选用的方法有　　　　　　　　　 和　　　　　　　 。

(5)一般来说，果实成熟过程中还伴随着绿色变浅，其原因是 　　　　　　　　　　　　　　　。

答案：(10分)(1)纤维素，纤维素酶，果胶质，果胶酶(2)A(3)适当降低温度，低温可降低有关酶的活性，延缓果实软化(4)用乙烯进行处理，适当提高贮存温度(5)叶绿素含量降低

32.(17分)(全国理综2)　

请用所给的实验材料和用具，设计实验来验证哺乳动物的蔗糖酶和淀粉酶的催化作用具有专一性。要求完成实验设计、补充实验步骤、预测实验结果、得出结论，并回答问题。　

实验材料与用具：适宜浓度的蔗糖酶、唾液淀粉酶、蔗糖、淀粉四种溶液，菲林试剂、试管、　37℃　恒温水浴锅，沸水浴锅。　

(1)若“+”代表加入适量的溶液，“-”代表不加溶液，甲、乙等代表试管标号，请用这些符号完成下表实验设计，请在答题卡上作答。　

(2)实验步骤：　

①按照上表中的设计，取试管、加溶液。　

②　

③　

④　

(3)结果预测：____________________________。　

(4)结论：__________________________________。　

(5)在上述试验中，如果仅将　37℃　恒温水浴锅的温度调到　20℃　。而在其他条件不变的情况下重做上述实验，出现砖红色试管中的颜色会比　37℃　时的浅，其原因是_______________。

22．(江苏多选)加工橘子罐头，采用酸碱处理脱去中果皮(橘络)，会产生严重污染。目前使用酶解法去除橘络，可减少污染。下列生长在特定环境中的4类微生物，可以大量产生所用酶的有

　 A．生长在麦麸上的黑曲霉　　 B．生长在酸奶中的乳酸菌

C．生长在棉籽壳上的平菇　　 D．生长在木屑上的木霉

3．(江苏)下列关于固定化酶和固定化细胞的叙述，正确的是

　 A．固定化细胞技术在多步连续催化反应方面优势明显

B．固定化酶的应用中，要控制好pH、温度和溶解氧

C．利用固定化酶降解水体中有机磷农药，需提供适宜的营养条件

　 D．利用固定化酵母细胞进行发酵，糖类的作用只是作为反应底物

34．(山东)(8分)(生物一生物技术实践)

人参是一种名贵中药材，其有效成分主要是人参皂苷。利用细胞培养技术生产人参皂苷的大致流程如下：

请回答：

(1)配制诱导愈伤组织的固体培养基，分装后要进行　　　　　　 　　　　　。

　　 接种前，要对人参根进行　　　　　　　 。

(2)用于离体培养的根切块，叫做　　　　　　　　 。培养几天后发现少数培养基被污染，若是有颜色的绒毛状菌落，属于　　　　　　 　污染；若是有光泽的黏液状菌落，属于　　　　　　

　　 污染。

(3)用少量　　　　　 酶处理愈伤组织，获取单细胞或小细胞团，在液体培养基中进行悬浮培养，可有效提高人参皂苷合成量。

(4)人参皂苷易溶于水溶性(亲水性)有机溶剂，从培养物干粉中提取人参皂苷宜选用　　　　　

　　 方法，操作时应采用　　　　　　　　 加热。

答案：(1)灭菌　　 消毒

　 (2)外植体　 真菌(霉菌)　　 细菌

　 (3)果胶

(4)萃取(浸取)　　 水浴

专题四酶的研究与应用

6. (安徽)下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是

A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白膝培养基，经高温、高压灭菌后倒平板

B.取10⁴、10⁵ 、10⁶倍的土壤稀释液和无菌水各0.1ml，分别涂布于各组平板上

C．将实验组和对照组平板倒置，37⁰C恒温培养24-48小时

D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数

3(重庆)下列有关大肠杆菌的叙述，正确的是

　 A大肠杆菌以复制方式进行繁殖，其拟核是一个环状DNA分子

　 B在含葡萄糖和乳糖的培养基上，大肠杆菌首先利用乳糖作碳源

　 C用大肠杆菌工程菌生产干扰素时．应及时添加核酸等生长因子

　 D处于对数期的大肠杆菌．常作为生产用的菌种和科研的材料

专题三植物组织培养技术

33.(10分)(全国理综2)　

利用微生物分解玉米淀粉生产糖浆，具有广阔的应用前景。但现有野生菌株对淀粉的转化效率低，某同学尝试对其进行改造，以获得高效菌株。　

(1)实验步骤：　

①配置________(固体、半固体、液体)培养基，该培养基的碳源应为________。　

②将_____________接入已灭菌的培养基平板上。　

③立即用适当剂量的紫外线照射，其目的是___________________。　

④菌落形成后，加入碘液，观察菌落周围培养基的颜色变化和变化范围的大小。周围出现_______________现象的菌落即为初选菌落，经分离、纯化后即可达到实验目的。　

(2)若已得到二株变异菌株I和II，其淀粉转化率较高，经测定菌株I淀粉酶的催化活性高，菌株II的淀粉酶蛋白含量高，经进一步研究发现，突变发生在淀粉酶基因的编码区或非编码区，可推测出菌株I的突变发生在_________区，菌株II的突变发生在____________区。

答案：(1)①固体、玉米淀粉；②野生菌株；③(诱发野生菌株发生基因突变)对野生菌株进行诱变；④(透明圈)浅色范围大；(2)编码区、非编码区