以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段：     

(1)…CTGCA  

(2)…AC   

(3)GC…

(4)…G     

(5)    G…    

(6) …GC…G          …TG      CG…        …CTTAA     ACGTC…          …CG

(7) GT…     

(8)AATTC…  CA…             G…

请用DNA连接酶将它们连接起来:

____和_____能连接成_________________________                             ;

____和_____能连接成_________________________                             ;

____和_____能连接成_________________________                             ;

____和_____能连接成_________________________                             ;

以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段。

你是否能用DNA连接酶将它们连接起来？

14分）、某质粒上有SalI、HindⅢ、BamHI三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如下图所示，请回答下列问题。

(1)将抗盐基因导入烟草细胞内,使烟草植株产生抗盐性状，这种新性状(变异性状)的来源属于______                          。

(2)如果将抗盐基因直接导入烟草细胞,一般情况下，烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐基因在烟草细胞中不能复制，也不能______                    。

(3)在构建重组质粒时,应选用______       和_____        _两种酶对______           和_____               _进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。

(4)基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，下图表示运用影印培养法(使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法)检测基因表达载体是否导入了农杆菌。

培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有______       、_____             _。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是______       菌落中的细菌。为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的______           作探针进行分子杂交检测，又要用一定浓度的盐水浇灌烟草植株从        水平鉴定烟草植株的耐盐性。

(5)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用_______          技术，愈伤组织经______               进而形成完整植株,此过程除营养物质外还必须向培养基中添加                      。

40.  ［生物——选修3:现代生物科技专题］(15分）

某质粒上有SalI、Hi_ndm、BamHI三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨 苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如下图所示，请回答下列问题。

(1)将抗盐基因导入烟草细胞内,使烟草植株产生抗盐性状，这种新性状(变异性状)的来 源属于______。

(2)如果将抗盐基因直接导入烟草细胞,一般情况下，烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐 基因在烟草细胞中不能______，也不能______。

(3)在构建重组质粒时,应选用______和______两种隳对______和______进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。

(4)  基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，下图 表示运用影印培养法(使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法)检 测基因表达载体是否导入了农杆菌。

培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有______、______。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是______菌落中的细菌。为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的______作探针进行分子杂交检测，又要用______方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性。

(5)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要 用_______技术，愈伤组织经______进而形成完整植株,此过程除营养物质外还必须向培养基中添加                         。

下图是利用质粒（有抗四环素基因、抗氨苄青霉素基因和Sal I、BamH I、Hind Ⅲ三种限制酶切割位点）获得转基因抗盐烟草的培育过程，请据图回答有关问题：

（1）将抗盐基因导入烟草细胞内，使烟草植株产生抗盐性状，这种新性状的产生所依据的原理是           。从基因文库中获得的抗盐基因可用          技术进行扩增。

（2）如果将抗盐基因直接导入烟草细胞，一般情况下，烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐基因在烟草细胞中不能               ，也不能合成抗盐基因的mRNA。

（3）为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的             作探针进行分子杂交检测，又要用一定浓度的盐水浇灌的方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性。

（4）图中将抗盐基因导入质粒，需用             限制酶对质粒和                 进行切割。

（5）烟草组织细胞具有                 ，因此，可以利用组织培养技术将导入抗盐基因的烟草组织细胞培育成植株。图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的              、                    。在形成愈伤组织的过程中，细胞的新陈代谢类型是                 。

40．【生物——选修3：现代生物科技专题】（15分）

下图是利用质粒（有抗四环素基因、抗氨苄青霉素基因和Sal I、BamH I、Hind Ⅲ三种限制酶切割位点）获得转基因抗盐烟草的培育过程，请据图回答有关问题：

（1）将抗盐基因导入烟草细胞内，使烟草植株产生抗盐性状，这种新性状的产生所依据的原理是           。从基因文库中获得的抗盐基因可用          技术进行扩增。

（2）如果将抗盐基因直接导入烟草细胞，一般情况下，烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐基因在烟草细胞中不能               ，也不能合成抗盐基因的mRNA。

（3）为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的             作探针进行分子杂交检测，又要用一定浓度的盐水浇灌的方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性。

（4）图中将抗盐基因导入质粒，需用             限制酶对质粒和                 进行切割。

（5）烟草组织细胞具有                 ，因此，可以利用组织培养技术将导入抗盐基因的烟草组织细胞培育成植株。图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的              、                    。在形成愈伤组织的过程中，细胞的新陈代谢类型是                 。

番茄不易储存与多聚乳糖醛酸酶（PG）有关，科学家将人工合成的反义多聚乳糖醛酸酶基因导入番茄，获得转基因延熟番茄，是番茄的存储时间大大延长。已知质粒上有Pst I、Sma I 、Hind III 、 Alu I 等四种限制酶切割位点。下图是转基因延熟番茄培育过程的示意图（a mpr为抗氨苄青霉素基因），其中1~ 4是培育过程中的相关步骤，I 、II是相关结构或细胞。请据图作答。

例1 在构建含反义多聚乳糖醛酸酶基因的表达载体时，若用Sma I与Pst I完全酶切含目的基因的DNA后，反应管中有________种片段。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，实际操作中，一般应选用限制酶___________，分别同时对_____________进行切割。
例2 通过农杆菌转化法，可将带有目的基因的T-DNA（重组质粒）导入番茄细胞。导入番茄细胞的目的基因，通常插入到细胞核某一条染色体的DNA上，使目的基因的遗传特性得以____________________。上述途径所获得的番茄，其后代并非每一个个体都含目的基因，原因是                   。
(3) 为了检测番茄细胞是否导入了目的基因，可以采用特定的DNA分子探针进行检测，也可以向植物组织培养基中加入_______________，以筛选获得导入上述重组质粒的特定受体细胞。
向正常番茄细胞内导入反义多聚乳糖醛酸酶基因后，发现多聚乳糖醛酸酶基因能正常转录形成mRNA，但细胞内却不再合成多聚乳糖醛酸酶（PG），其原因最可能是____________。

番茄不易储存与多聚乳糖醛酸酶（PG）有关，科学家将人工合成的反义多聚乳糖醛酸酶基因导入番茄，获得转基因延熟番茄，是番茄的存储时间大大延长。已知质粒上有Pst I、Sma I 、Hind III 、 Alu I 等四种限制酶切割位点。下图是转基因延熟番茄培育过程的示意图（a mpr为抗氨苄青霉素基因），其中1~ 4是培育过程中的相关步骤，I 、II是相关结构或细胞。请据图作答。

例1  在构建含反义多聚乳糖醛酸酶基因的表达载体时，若用Sma I与Pst I完全酶切含目的基因的DNA后，反应管中有________种片段。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，实际操作中，一般应选用限制酶___________，分别同时对_____________进行切割。

例2  通过农杆菌转化法，可将带有目的基因的T-DNA（重组质粒）导入番茄细胞。导入番茄细胞的目的基因，通常插入到细胞核某一条染色体的DNA上，使目的基因的遗传特性得以____________________。上述途径所获得的番茄，其后代并非每一个个体都含目的基因，原因是                    。

 (3) 为了检测番茄细胞是否导入了目的基因，可以采用特定的DNA分子探针进行检测，也可以向植物组织培养基中加入_______________，以筛选获得导入上述重组质粒的特定受体细胞。

向正常番茄细胞内导入反义多聚乳糖醛酸酶基因后，发现多聚乳糖醛酸酶基因能正常转录形成mRNA，但细胞内却不再合成多聚乳糖醛酸酶（PG），其原因最可能是____________。

番茄不易储存与多聚乳糖醛酸酶（PG）有关，科学家将人工合成的反义多聚乳糖醛酸酶基因导入番茄，获得转基因延熟番茄，是番茄的存储时间大大延长。已知质粒上有Pst I、Sma I 、Hind III 、 Alu I 等四种限制酶切割位点。下图是转基因延熟番茄培育过程的示意图（a mpr为抗氨苄青霉素基因），其中1~ 4是培育过程中的相关步骤，I 、II是相关结构或细胞。请据图作答。

在构建含反义多聚乳糖醛酸酶基因的表达载体时，若用Sma I与Pst I完全酶切含目的基因的DNA后，反应管中有________种片段。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，实际操作中，一般应选用限制酶___________，分别同时对_____________进行切割。

通过农杆菌转化法，可将带有目的基因的T-DNA（重组质粒）导入番茄细胞。导入番茄细胞的目的基因，通常插入到细胞核某一条染色体的DNA上，使目的基因的遗传特性得以____________________。上述途径所获得的番茄，其后代并非每一个个体都含目的基因，原因是                    。

(3) 为了检测番茄细胞是否导入了目的基因，可以采用特定的DNA分子探针进行检测，也可以向植物组织培养基中加入_______________，以筛选获得导入上述重组质粒的特定受体细胞。

向正常番茄细胞内导入反义多聚乳糖醛酸酶基因后，发现多聚乳糖醛酸酶基因能正常转录形成mRNA，但细胞内却不再合成多聚乳糖醛酸酶（PG），其原因最可能是____________。