5、苏云金杆菌（Bt）能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。下图是转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程示意图（为抗氨苄青霉素基因），据图回答下列问题。

（1）将图中①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有          种DNA片段。

（2）图中②表示 HindⅢ与BamHⅠ酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得      种重组质粒；如果换用Bst l与BamHⅠ酶切，目的基因与质粒连接后可获得          种重组质粒。    

（3）目的基因插入质粒后，不能影响质粒的              。

（4）图中③的Ti质粒调控合成的vir蛋白，可以协助带有目的基因的T—DNA导人植物细胞，并防止植物细胞中             对T—DNA的降解。

（5）已知转基因植物中毒素蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡。而该毒素蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞                            。 

（6）生产上常将上述转基因作物与非转基因作物混合播种，其目的是降低害虫种群中的

                基因频率的增长速率。

三、综合题

（每空？ 分，共？ 分）

4、科学家运用基因工程技术将人胰岛素基因与大肠杆菌的

质粒DNA分子重组，并且在大肠杆菌体内获得成功表

达。图示a处为胰岛素基因与大肠杆菌质粒DNA结合

的位置，它们彼此能结合的依据是          （    ）

       A．基因自由组合定律                            

       B．半保留复制原则

       C．基因分离定律       

       D．碱基互补配对原则

二、填空题

（每空？ 分，共？ 分）

3、2008年诺贝尔化学奖授予了“发现和发展了水母绿色荧光蛋白“的三位科学家。将绿色荧光蛋白基因的片段与目的基因连接起来组成一个融合基因，再将该融合基因转入真核生物细胞内，表达出的蛋白质就会带有绿色荧光。绿色荧光蛋白在该研究中的主要作用是                                                                                        （    ）

A．追踪目的基因在细胞内的复制过程

B．追踪目的基因插入到染色体上的位置

C．追踪目的基因编码的蛋白质在细胞内的分布

D．追踪目的基因编码的蛋白质的空间结构

2、钱永健先生因在研究绿色荧光蛋白方面的杰出成就而获2008年诺贝尔奖。在某种生物中检测不到绿色荧光，将水母绿色荧光蛋白基因转入该生物体内后，结果可以检测到绿色荧光。由此可知           （    ）

    A．该生物的基因型是杂合的

    B．该生物与水母有很近的亲缘关系

    C．绿色荧光蛋白基因在该生物体内得到了表达

    D．改变绿色荧光蛋白基因的1个核苷酸对，就不能检测到绿色荧光

1、下列关于基因工程的叙述，错误的是                                                                      （    ）

A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物

B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶

C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性

D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达

38、番茄营养丰富，是人们喜爱的一类果蔬。但普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。为满足人们的生产生活需要，科学家们通过基因工程技术，培育出了抗软化、保鲜时间长的番茄新品种。（操作流程如图）请回答：

（1）过程①需要的工具酶有                               。

（2）在构建基因表达载体时，除了要在重组DNA中插入目的基因外，还需要有

                                                                  。

（3）提取目的基因采用的限制性核酸内切酶的识别序列和切点是—↓GATC—。在目的基因的两侧各有1个酶的切点，请画出目的基因两侧被限制酶切割后形成的黏性未端的过程示意图。

                                                                      。

（4）在番茄新品种的培育过程中，将目的基因导入受体细胞的方法叫做             。

（5）从图中可见，mRNA1和mRNA2的结合直接导致了                 无法合成，最终使番茄获得了抗软化的性状。

（6）培养②、③为植物组织培养过程中的                          。

（7）上述转基因番茄会通过花粉将抗多聚半乳糖醛酸酶基因传播给其它植物而造成基因污染，原因是                                      ，请你提出一个上述转基因工程的改良方案，以防止这样的污染发生。

37、天然酿酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶类，用作发酵原料的淀粉需经一系列复杂的转化过程才能被利用。研究者从某丝状真菌中获取淀粉酶基因并转人酿酒酵母菌，获得的酿酒酵母工程菌可直接利用淀粉产生酒精。请回答下列问题：

   （1）将淀粉酶基因切割下来所用的工具是                  ，用                将淀粉酶基因与载体拼接成新的DNA分子，下一步将该DNA分子            ，以完成工程菌的构建。

   （2）若要鉴定淀粉酶基因是否插人酿酒酵母菌，可采用的检测方法是             ；若要鉴定淀粉酶基因是否翻译成淀粉酶，可采用                       检测。将该工程菌接种在含淀粉的固体平板培养基上，培养一定时间后，加入碘液，工程菌周围出现透明圈，请解释该现象发生的原因。

（3）如何进一步鉴定不同的转基因工程菌菌株利用淀粉能力的大小？

（4）微生物在基因工程领域中有哪些重要作用？

36、目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图一所示。

（1）构建人工质粒时要有抗性基因，以便于                     。

（2）pBR32Z分子中有单个EcoRI限制酶作用位点，EcoR 1只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoRI的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端。                    。

（3）pBR322分子中另有单个的BamHI限制酶作用位点，现将经BamHI处理后的质粒与用另一种限制酶BgIⅡ处理得到的目的基因，通过DNA连接酶作用恢复          键，成功的获得了重组质粒。说明                                      。

（4）为了检测上述重组质粒是否导入原本无amp^R和tet^R的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果（空圈表示与图二对照无菌落的位置）。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是                 ，图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是                  。

五、综合题

（每空？ 分，共？ 分）

35、糖尿病是一种常见病，且发病率有逐年上升的趋势。下图是利用基因工程技术生产胰岛素的操作过程示意图，请据图回答。

（1）过程②必需的酶是            酶。

（2）能否利用人的皮肤细胞来完成①的过程？       ，为什么？                                              

                                                                  。

（3）若A中共有a个碱基对，其中腺嘌呤有b个，则③④⑤过程连续进行5次，至少需要提供鸟嘌呤         个。

（4）在利用AB获得C的过程中，必须用                切割A和B，再加入                 ，才可以形成C。

（5）在进行基因工程操作过程中，胰岛素基因必需与运载体——质粒结合后才能进入大肠杆菌体内，并且在细菌内增殖。质粒的化学本质是一种                   。

（6）不同生物间基因的移植成功，说明生物共用一套                    。