Question

【题目】（六）回答下列有关遗传信息传递与表达的问题。

利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素，图甲中的三个DNA片段上以此表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图乙为某种表达载体示意图（载体上的EcoR I、Sau3A I的切点是唯一的）。

【1】质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有_______________________。

【2】可以从下列哪些人体细胞中获取生产人胰岛素的目的基因 （多选题）。

A. 消化道黏膜上皮细胞 B. 胰岛A细胞

C. 胰岛B细胞 D. 造血干细胞

【3】经BamH I酶切割得到的目的基因可以与图乙所示质粒被_____________酶切后的产物连接，理由是_______________。连接后的重组质粒_____（能、不能、不一定）被BamH I切割。

【4】将重组质粒导入到大肠杆菌受体细胞，可用含有___________的培养基进行初步筛选。目的基因成功表达的标志是________________。

【5】已知图乙所示质粒经EcoRI和Sau3AI联合酶切后形成2.0 kb和4.2 kb（1 kb = 1000对碱基）两种DNA片段，若将0.8 kb的单个基因插在质粒的Sau3AI位点处，所形成的重组质粒用EcoRI和Sau3AI联合酶切后，能形成的DNA片段分别为 。

A. 2.8 2.0 2.2 B. 1.8 2.0 2.2

C. 4.0 1.8 1.0 D. 2.0 0.8 4.2

Answer 1

【答案】

【1】能自我复制、具有标记基因、能启动外源目的基因的转录和翻译、含有多个酶切位点

【2】ABCD

【3】Sau3AⅠ限制酶Sau3AⅠ与BamHⅠ切割后形成的黏性末端相同不一定

【4】四环素合成胰岛素

【5】D

【解析】据图分析，图甲中三种限制酶的识别和切割位点不同，但是BamH I和Sau3A I漏出的粘性末端相同，可以用DNA连接酶连接；图乙质粒上含有启动子、终止子、复制原点、标记基因（四环素抗性基因）、EcoR I和Sau3A I两种限制酶的切割位点。

【1】质粒作为运载体，应具备的基本条件有：能自我复制、具有标记基因、能启动外源目的基因的转录和翻译、含有多个酶切位点等。

【2】消化道黏膜上皮细胞、胰岛A细胞、胰岛B细胞、造血干细胞都是由受精卵增殖分化而来的，遗传物质不变，都可以提取到人胰岛素基因，故选ABCD。

【3】分析图解可知，限制酶Sau3AI和BamHI酶切割后形成的黏性末端相同，因此经BamHI酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被Sau3AI酶切后的产物连接；BamHI酶识别的序列为GGATCC，Sau3AⅠ限制酶识别的序列为GATC，因此连接后的重组质粒不一定被BamHI切割。

【4】重组质粒中含有四环素抗性基因，将重组质粒导入到大肠杆菌受体细胞，可用含有四环素的培养基进行初步筛选。目的基因是胰岛素基因，胰岛素基因成功表达的标志是合成胰岛素。

【5】若将0.8kb的单个基因插在质粒的Sau3AI位点处，所形成的重组质粒中含有2个Sau3AI切割位点和1个EcoRI切割位点，因此重组质粒用EcoRI和Sau3AI联合酶切后，能形成的DNA片段分别为4.2kb、0.8kb、2kb。