Question

【题目】下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。复制原点是质粒能正常复制的必需组成。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lcZ为蓝色显色基因，lacZ正常表达菌落呈蓝色。EcoRⅠ、PvuⅠ为相应的限制酶切割位点，括号内的数据是该切点与复制原点的距离，单位为kb(1kb=1000个碱基对)。回答下列问题：

（1）用图中的目的基因与质粒构建基因表达载体时，应该选择质粒________(填“质粒A”“质粒B”或者“质粒C”)，选择的限制酶是___________。

（2）转录的起始部位称为____________，是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶______________________的部位。

（3）如果选择的质粒与目的基因重组成功，并且在受体细胞中能正常表达，则所形成的重组质粒用EcoRⅠ完全酶切，并进行电泳观察，可出现的片段长度有_____________或____________。

（4）导入大肠杆菌后，为了筛选出含目的基因的大肠杆菌，在普通琼脂培养基中还需加入_________，形成的菌落颜色为_____________。

Answer 1

【答案】 质粒B PvuⅠ 启动子 识别与结合 3.6kb、3.1kb 1.1kb、5.6kb 氨苄青霉素 白色

【解析】试题分析：质粒A缺少标记基因、质粒C在用和目的基因相同的限制酶切割时，复制原点会被限制酶切割，会影响重组质粒的自主复制，所以质粒A、C不能作为基因工程的运载体，质粒B可以作为载体；由图可知，获取目的基因使用的限制酶是PvuⅠ，所以切割质粒B也用该限制酶。

（1）据试题分析可知，用图中的目的基因与质粒构建基因表达载体时，应该选择质粒B；由图可知，获取目的基因使用的限制酶是PvuⅠ，所以切割质粒B也用该限制酶。

（2）启动子是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是DNA转录的起点；是RNA聚合酶识别与结合的部位。

（3）要将目的基因和质粒B形成重组质粒，需用PvuⅠ限制酶，目的基因和质粒B形成的重组质粒长度为2.7-0.1+（4.0-1.0）=5.6kb（质粒且切割后形成的大的片段+切割目的基因时形成的大片段）、0.1+1.0=1.1kb（质粒且切割后形成的小的片段+切割目的基因时形成的小片段）或2.7-0.1+1.0=3.6（质粒且切割后形成的大的片段+切割目的基因时形成的小片段）、0.1+3.0=3.1（质粒且切割后形成的小的片段+切割目的基因时形成的大片段）。

（4）含目的基因的重组质粒B含有的标记基因是Ap（氨苄青霉素抗性基因），所以含目的基因的大肠杆菌也含有Ap（氨苄青霉素抗性基因），因此在普通琼脂培养基中还需加入氨苄青霉素可以筛选出来；在目的基因与质粒B构建基因表达载体时，选择的限制酶是PvuⅠ，破坏了lacZ基因，因此形成的菌落颜色为白色。