[题目]下图是利用工程菌生产人生长激素(由人垂体细胞产生的一种蛋白质类激素)的实验流程.所用的pBR322质粒含有限制酶pstⅠ.EcoRⅠ和HindⅢ的切点各一个.且三种酶切割形成的黏性末端各不相同.而Ampr表示青霉素抗性基因.Tetr表示四环素抗性基因.请据图回答以下相关问题:(1)过程①所用细胞是 .过程②所用的酶是 .(2)人生长� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】下图是利用工程菌(大肠杆菌)生产人生长激素（由人垂体细胞产生的一种蛋白质类激素）的实验流程。所用的pBR322质粒含有限制酶pstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切点各一个，且三种酶切割形成的黏性末端各不相同，而Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因。请据图回答以下相关问题：

（1）过程①所用细胞是________________，过程②所用的酶是_________。

（2）人生长激素基因在经③处理之前需经过PCR扩增，扩增时应在PCR扩增仪中加入________酶用以催化互补链的合成。

（3）过程④所用的酶是___________________________。

（4）若用限制酶PstⅠ切割，完成过程④、⑤后，将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上，再将甲培养基上的单个大肠杆菌接种到丙培养基上，待形成12个菌落后，将相应菌落的一部分转接到乙培养基的相同位置上。一段时间后，菌落的生长状况如图乙、丙所示。接种到培养基乙上能存活的是导入含__质粒的大肠杆菌。生产人生长激素的工程菌应从丙培养基的菌落中选取，选取的依据是______。

【答案】人垂体细胞逆转录（反转录）酶 Taq酶（热稳定DNA聚合酶） DNA连接酶完整的pBR322（Ampr和Tetr）（普通质粒或非重组质粒均可或填含Ampr和Tetr抗性）在丙中能存活，在乙中不能存活

【解析】试题分析：本题考查基因工程，考查对目的基因获取、标记基因作用的理解。解答此题，可根据图中限制酶的识别位点（目的基因插入位置）和标记基因是否被破坏判断受体菌能否在含抗生素的培养基上存活。

（1）人体内只有垂体细胞可以合成生长激素，过程①应从垂体细胞中提取人生长激素的mRNA，过程②为逆转录过程，应使用逆转录酶。

（2）PCR扩增时应在PCR扩增仪中加入Taq酶（热稳定DNA聚合酶）酶用以催化互补链的合成。

（3）过程④把人生长激素基因和切割后的质粒进行连接，需要使用DNA连接酶。

（4）用限制酶PstⅠ切割，用DNA连接酶连接后，可能出现质粒自身连接形成普通质粒（Ampr结构恢复完整）、目的基因和质粒连接形成重组质粒（质粒上的Ampr被破坏，Tetr保持完整）；将三角瓶内的大肠杆菌接种到甲培养基上，含有普通质粒或重组质粒的大肠杆菌可以存活；培养基乙上能存活的是导入含完整的pBR322（Ampr和Tetr）（普通质粒、非重组质粒或含Ampr和Tetr抗性）质粒的大肠杆菌。含有重组质粒的大肠杆菌在含有四环素的培养基上可以存活，在同时含有青霉素和四环素的培养基上不能存活。

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