Question

【题目】（四）回答基因工程的相关问题：

如表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图24、图25中标注了相关限制酶的酶切位点，请回答下列问题：

【1】用图24、25中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用BclI酶和_________酶切割，酶切后的质粒和目的基因片段，通过______________ 酶作用后获得重组质粒。

【2】若用上述限制酶获得的目的基因长度为1.0 kb（1 kb = 1000对碱基），质粒长度为3.2 kb，则获得重组质粒的长度为______。

A. < 4.2 kb B. > 4.2 kb C. = 4.2 kb

【3】重组质粒成功导入受体细胞的概率一般仅在10-7，为了筛选出导入了重组质粒的大肠杆菌，在导入完成后，将所有大肠杆菌分别在含有四环素和氨苄青霉素的培养基中培养，大肠杆菌在两种培养基的生长状况不可能的是______，可能性最大的是______。

A. 在含氨苄青霉素的培养基上能正常生长,在含四环素的培养基上不能正常生长

B. 在含四环素的培养基上能正常生长,在含氨苄青霉素的培养基上不能正常生长

C. 在含氨苄青霉素的培养基和含四环素的培养基上都能正常生长

D. 在含氨苄青霉素的培养基和含四环素的培养基上都不能正常生长

【4】用Sau3A I限制酶______（填 能或不能）识别并切割BamHI酶的识别序列，若用Sau3A I限制酶完全切割图24质粒时，可获得__________种大小不同的DNA片段。

【5】若想在山羊的乳汁中收获上述目的基因的表达产物，则需将重组质粒导入至山羊的________________细胞中，那么上述过程属于_______。

Answer 1

【答案】

【1】HindⅢDNA连接酶

【2】A

【3】AD

【4】能3

【5】受精卵B

【解析】分析图24：外源DNA上含有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII和Sau3AI的切割位点，其中限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII的识别序列都能被Sau3kI识别。分析图25：质粒上有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII三种限制酶的识别序列和切割位点，其中BamHⅠ的切割位点位于两种抗生素抗性基因上.选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但使用BamHⅠ可能破坏质粒中的两种抗性基因，BclI和HindⅢ都只会破坏氨苄青霉素抗性基因，四环素抗性基因完好，因此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割。

【1】选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但使用BamHⅠ可能破坏质粒中的两种抗性基因，BclI和HindⅢ都只会破坏氨苄青霉素抗性基因，四环素抗性基因完好，因此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割．酶切后的载体和目的基因片段，通过连接酶作用后获得重组质粒。

【2】质粒被BclI和HindⅢ切割后，会丢失两种酶切割位点之间的一段DNA，参与形成重组质粒的质粒长度<3.2kb，因此获得重组质粒的长度<1+3.2=4.2kb，故选A。

【3】在形成重组质粒时，破坏了氨苄青霉素抗性基因，但四环素抗性基因完好。成功导入重组质粒的理想大肠杆菌，应该具有四环素抗性特性，不具有抗氨苄青霉素特性，即在含四环素的培养基上能正常生长，在含氨苄青霉素的培养基上不能正常生长；但重组质粒成功导入受体细胞的概率一般仅在10-7，因此可能出现含有重组质粒的大肠杆菌、不含有重组质粒的大肠杆菌。因此将所有大肠杆菌分别在含有四环素和氨苄青霉素的培养基中培养，大肠杆菌在两种培养基的生长状况不可能的是在含氨苄青霉素的培养基上能正常生长，在含四环素的培养基上不能正常生长，因为含有重组质粒的大肠杆菌中氨苄青霉素抗性基因已被破坏了，但四环素抗性基因完好，因此肯定具有四环素抗性特性；不含有重组质粒的大肠杆菌都不具有抗性特性；又因为重组质粒成功导入受体细胞的概率一般仅在10-7，成功概率较小，大多数大肠杆菌是不含有重组质粒，因此可能性最大的在含氨苄青霉素的培养基和含四环素的培养基上都不能正常生长。

【4】根据表格中信息可知：BamHI酶识别和切割序列为，Sau3kI识别和切割的序列，可知BamHI酶的识别序列包含有Sau3kI识别的序列，因此用Sau3AI限制酶能识别并切割BamHI酶的识别序列。由此类推可知：限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII的识别序列都能被Sau3kI识别，因此用Sau3kI完全切割图质粒可获得3种大小不同的DNA片段。

【5】将目的基因导入动物细胞中，通常以受精卵作为受体细胞．该技术是动物基因工程的范畴。