[生物--选修模块3:现代生物科技专题]如图一为含有目的基因的外源DNA.图二为某一般质粒.表中是几种限制酶识别序列及其切割位点．用图中的外源DNA与质粒构建重组质粒．限制酶 BamH Sma EcoR Hind 识别序列及切割位点请根据上述信息分析回答:(1)外源DNA.质粒分别有 . 个游离的磷酸基团．(2)用Sma I限制酶切割外源DNA.切开的是和之间相� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

[生物--选修模块3：现代生物科技专题]
如图一为含有目的基因的外源DNA，图二为某一般质粒，表中是几种限制酶识别序列及其切割位点．用图中的外源DNA与质粒构建重组质粒．

限制酶	BamH	Sma	EcoR	Hind
识别序列及切割位点

请根据上述信息分析回答：
（1）外源DNA、质粒分别有

、

个游离的磷酸基团．
（2）用Sma I限制酶切割外源DNA，切开的是

和

之间相连的键．
（3）如果使用EcoR工酶切割外源DNA和质粒，将目的基因片段与切割后的质粒混合，加入

酶，获得的环状DNA可能有几种情况？
（4）如果使用BamH I和HindⅢ两种限制酶同时处理外源DNA和质粒，比用EcoRI酶切割的优点是

．
（5）经上述操作所得基因表达载体除

外，还必须有

和

，目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用．
（6）将重组质粒导入大肠杆菌中，培养基中需加入

进行鉴别和筛选含有

的细胞．

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：据图一和二分析，外源DNA上有多个限制酶切割位点，SmaI限制酶会破坏目的基因和质粒上的标记基因；用EcoR工酶切割外源DNA两侧形成相同的黏性末端，会发生自身环化；因此用BamH I和HindⅢ两种限制酶同时处理外源DNA和质粒．

解答： 解：（1）外源DNA是双链的DNA，含有2个游离的磷酸基团；质粒是双链环状DNA分子，没有游离的磷酸基团．
（2）根据表格分析，Sma I限制酶能识别CCGGG，并在C（胞嘧啶脱氧核苷酸）和G（鸟嘌呤脱氧核苷酸）之间切割磷酸二酯键．
（3）外源DNA和质粒上都有EcoRⅠ酶切割位点，加入DNA连接酶获得的环状DNA可能有3种情况，即目的基因-目的基因、质粒-质粒、目的基因-质粒．
（4）用EcoRI酶切割外源DNA和质粒两者形成相同的黏性末端，则外源DNA和质粒的黏性末端会自身环化，甚至是反向接入；因此使用BamH I和HindⅢ两种限制酶同时处理外源DNA和质粒，能避免切割的外源DNA、质粒的黏性末端自身环化．
（5）基因表达载体含有目的基因、启动子、终止子和标记基因；目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用．
（6）质粒中含有抗生素抗性基因，重组质粒导入大肠杆菌培养时，培养基中加入抗生素进行鉴别和筛选含有重组质粒的细胞．
故答案为：
（1）2   0
（2）胞嘧啶脱氧核苷酸   鸟嘌呤脱氧核苷酸
（3）DNA连接酶 3
（4）避免切割的外源DNA、质粒的黏性末端自身环化、
（5）目的基因   启动子终止子
（6）抗生素    重组质粒

点评：本题考查基因工程的相关知识，意在考查学生的识图和理解能力，属于中档题．

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、

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．

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