Question

【题目】基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示质粒。

请回答下列问题：

（1）请在方框内写出由图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA所形成的粘性末端。

____

（2）图3为目的基因中的某一片段，连接②处化学键的酶有_____________。

（3）若利用PCR技术増加目的基因的数量，由图2可知，A、B、C、D四种单链DMA片段中除了B作为引物外，_________(填写A或C或D）亦可作为引物。

（4）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是__________。

（5）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含__________基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。

Answer 1

【答案】 或 DNA聚合酶和DNA连接酶 C EcoRⅠ和PstⅠ 抗四环素

【解析】【试题分析】

本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作工具和操作步骤，能正确理解限制酶的特点。需要考生具备一定的识图能力和获取有效信息的能力，然后再结合题意梳理所学基础知识，对各小题进行分析作答。

（1）由图1可知，限制酶EcoRⅠ能够专一识别GAATTC序列，并在G和A之间将这段序列切开。所以限制酶EcoRⅠ切割外源DNA所形成的粘性末端可表示为：或。

（2）图3中②处化学键为磷酸二酯键，DNA聚合酶和DNA连接酶都可连接②磷酸二酯键。

（3）若利用PCR技术增加目的基因的数量，由图2可知，DNA复制只能从5’到3’，因此A、B、C、D四种单链DNA片段中应选取 B和C作为引物。

（4）用两种相同的限制酶分别切断含目的基因的DNA片段和质粒，可使目的基因和质粒定向连接；质粒上至少保留一个抗性基因作为标记基因，有利于受体细胞的筛选。综合分析图2中目的基因两端的限制酶切位点、图4中质粒上的限制酶切位点，可推知应该选择限制酶是PstⅠ、EcoRⅠ进行切割，这样质粒上可以保留抗四环素基因，完全可以达到上述目的。

（5）由前面分析可知，重组质粒上的抗生素抗性基因属于标记基因，应将该重组质粒导入到不含抗四环素基因的大肠杆菌细胞内，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。