Question

【题目】下图是制备抗埃博拉病毒VP40蛋白的单克隆抗体的过程：

（1）若要体外获得大量的VP40基因，可采用_______技术进行扩增，若该目的基因循环扩增3次，理论上需要消耗_______个引物。

（2）过程①中除选用EcoRⅠ和XhoⅠ两种限制酶外，还要用到________酶。

（3）过程②中VP40基因进入大肠杆菌后维持稳定并表达的过程称为____________，大肠杆菌等原核生物常作为受体细胞的原因 ______________________________（写出两点）。

（4）与植物原生质体融合相比，过程④特有的诱导融合的方法是用____________处理。通常在选择培养基中需加入__________，目的是防止培养过程中的污染。对杂交瘤细胞还需要进行克隆化培养和_______________，最终获得单克隆抗体。

Answer 1

【答案】PCR 14 DNA连接 转化 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等 灭活的病毒 抗生素 抗体检测

【解析】

本题以图文结合的形式，综合考查学生对基因工程的基本操作程序、动物细胞融合技术、生产单克隆抗体等相关知识的识记和理解能力，以及识图分析能力。

(1) VP40基因为目的基因，可采用PCR技术对其进行扩增。PCR技术的原理是DNA双链复制的原理，若该目的基因循环扩增3次，则共形成23＝8个目的基因，除了最初亲代目的基因的两条模板链不含引物外，凡是新形成的子链均含有引物，因此理论上需要消耗2×8－2＝14个引物。

(2) 过程①为基因表达载体的构建，除选用EcoRⅠ和XhoⅠ两种限制酶切割含有VP40基因的DNA片段和质粒外，还要用到DNA连接酶将切割后获得的VP40基因和质粒连接。

(3) 过程②为将构建的基因表达载体导入受体细胞（大肠杆菌细胞）中，VP40基因进入大肠杆菌后维持稳定并表达的过程称为转化。由于大肠杆菌等原核生物具有繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等特点，因此在基因工程中常作为受体细胞。

(4) 过程④为诱导动物细胞融合。与植物原生质体融合相比，过程④特有的诱导融合的方法是用灭活的病毒处理。通常在选择培养基中加入抗生素的目的是防止培养过程中的污染。在单克隆抗体生产的过程中，对杂交瘤细胞还需要进行克隆化培养和抗体检测，以筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞，才能最终获得单克隆抗体。