Question

【题目】某生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如左表所示，实验步骤如图所示。请分析回答问题：

（1）从培养基的物理性质分析，该培养基属于_____________；从培养基的用途分析，该培养基属于_____________。

（2）在实验过程中：①培养基、培养皿；②玻棒、试管、锥形瓶、吸管；③瘤胃中液体；④涂布器。其中需要灭菌是_____________（填序号）。

（3）分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。甲同学坚信自己的实验结果是准确的，则甲同学的实验结果产生差异的原因最可能是____________

（填序号）

①取样不同 ②培养基污染 ③操作失误 ④没有设置对照

（4）为确定实验中微生物属于尿素分解菌，可在培养基中加入酚红指示剂，若菌落变成__________色，说明瘤胃中的微生物能分解酵素。理由是______________________________。

（5）为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数，将接种的培养皿放置在37°C恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计具有红色环带的菌落数，结果如下表，其中___________倍的稀释比较合适。

（6）若要在如图实验中对瘤胃中的目的菌进行计数，应采用什么计数法？___________________，该方法的缺点是容易导致结果偏小，请写出结果偏小的原因_______________________________。（写出一项即可）

Answer 1

【答案】 固体培养基 选择培养基 ①、②、④ ① 红 细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，PH增高，使酚红指示剂变红 106或105 活菌计数法 两个或多个细胞可能共同形成一个菌落，导致结果偏小（一些细菌在培养过程中死亡后，不能形成菌落，导致结果偏小）

【解析】（1）分析培养基的成分组成可知，有凝固剂——琼脂，说明该培养基属于固体培养基。该实验的目的是筛选到能高效降解尿素的细菌，因此培养基中加入尿素的目的是能高效降解尿素的细菌（目的菌），不能分解尿素的细菌将因缺少氮源无法生长繁殖，因此从功能上看，该培养基属于选择培养基。

（2）为了保证培养物不被污染，对培养细菌用的培养基与培养皿和玻璃棒、试管、锥形瓶和吸管要进行灭菌，实验操作者的双手要进行消毒，但实验所需的目的菌来源于瘤胃中液体，不能灭菌，其余的都需要灭菌和消毒，所以选择①、②、④。

（3）由题意知，该同学与其他同学获得的菌落数差异很大，可能的原因是采用的取样不同，培养基灭菌不彻底，培养基被污染；或者是实验过程中没有进行无菌操作，如果甲同学操作是正确的，则最可能的原因是取样不同。

（4）尿素被分解尿素的菌氧化成氨气，氨气会使培养基碱性增强，PH升高，指示剂酚红变红，因此以通过在培养基中加入酚红指示剂，检测培养基pH的变化来判断尿素是否被分解。

（5）观察并统计菌落数应选30-300之间的进行统计，故应选106或105倍的稀释比较合适。

（6）对瘤胃中的活菌进行计数，应采用活菌计数法。该方法的缺点是容易导致结果偏小，原因是两个或多个细胞可能共同形成一个菌落或者一些细菌在培养过程中死亡后，不能形成菌落，导致结果偏小。