Question

【题目】大肠杆菌是寄生于人和动物肠道中的细菌，其代谢产物能与染料伊红美蓝反应，使菌落呈黑色。测定水样是否符合饮用水卫生标准，常用滤膜测定大肠杆菌的数目。流程如下图所示：

（滤膜法的大致流程：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到伊红美蓝的培养基（EMB 培养基）上培养→统计菌落数目。）

（1）培养大肠杆菌时，常用的接种方法有______________，过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，其中需要进行灭菌处理的是______________。

（2）从物理性质上划分，EMB培养基属于______________培养基，为检测培养基灭菌是否彻底，对于固体培养基应采用的检测方法是______________。

（3）为检测严重污染水体中大肠杆菌数量，将水样适当稀释后，取样涂布在上述平板培养基中，应选择颜色为______________的菌落进行计数。该方法是通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数，其原理是______________。

（4）该同学进一步思考，利用滤膜法也可能用于测定待测水样中其他微生物的数目。他取了两份水样，一份待测水样来自变酸的果酒，从中检测到两种微生物，它们在结构上的主要区别是_____________________。另一份来自湖泊，若要通过测量蓝藻的数目来研究水华，则培养基配方中则必须添加___________（水、无机盐、碳源、氮源）。

Answer 1

【答案】平板划线法和稀释涂布平扳法 滤杯、滤膜和滤瓶 固体 将未接种的培养基在恒温箱中培养一段时间，观察培养基上是否有菌落产生 黑色 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的—个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌 有无（成形的）细胞核 水、无机盐、氮源

【解析】

滤膜法是检测水样中大肠细菌群的方法，将一定量水样注入已灭菌的微孔薄膜的滤器中，经过抽滤，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴于伊红美蓝培养基上，经培养后计数和鉴定滤膜上生长的大肠菌群菌落，依据过滤水样计算每升或每100毫升水样中的大肠菌群数；该方法操作简单、快速，主要适用于杂质较少的水样。

（1）接种大肠杆菌等微生物常用的方法有平板划线法和稀释涂布平扳法；过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，这些实验仪器都需要经过灭菌处理，与过滤有关的操作都要在酒精灯火焰旁进行，防止杂菌的污染。

（2）从物理性质上划分，EMB培养基属于固体培养基；培养大肠杆菌时，在接种前通常需要检测培养基是否被污染，对于固体培养基应将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。

（3）根据题意可知，“大肠杆菌代谢产物能与染料伊红美蓝反应，使菌落呈黑色”，因此为检测严重污染水体中大肠杆菌数量，将水样适当稀释后，取样涂布在上述平板培养基中，应选择颜色为黑色的菌落进行计数。该方法是通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数，其原理是当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。

（4）变酸的果酒中有两种微生物，分别是酵母菌和醋酸菌，两者分别属于真核生物和原核生物，它们在结构上的主要区别是有无（成形的）细胞核；蓝藻可以进行光合作用，属于自养型微生物，因此其培养基中必须添加的成分有水、无机盐、氮源。