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    【题目】【生物——选修1：生物技术实践】欲从土壤中筛选出能产生脲酶的微生物并予以纯化计数，采用了下图所示的基本操作流程，请回答下列问题：

    （1）取得土样后应先用 （填试剂）对土壤进行梯度稀释，然后将稀释涂布在平面培养基上，这种选择培养基在营养组成上的重要特点是 。在这样的培养基上长出的细菌 （填“一定”或“不一定”）都能产生脲酶。若在平板中加入酚红，目的菌落出现的变化是 。

    （2）若要对相应微生物进行计数，一个稀释度应涂布2到3个平板，并计算 。若稀释不够高，所得的数据与实际值比较应 （填“偏大”“偏小”或“相等”）。经涂布获得的菌落可以采用平板划线法进一步纯化，每次划线后接种环必须 ，才能再次用于划线。获得的纯化菌种可以保存在试管中，塞上棉塞或盖上封口膜，不能密封，原因是 。

    【答案】（15分，每空2分，特殊说明除外）

    （1）无菌水 氮源只有尿素 不一定（1分） 菌落周围出现红圈

    （2）平均值 偏小 灼烧 细菌有氧呼吸需要气体流通

    【解析】（1）对土壤进行梯度稀释应用无菌水，由题意可知要筛选能产生脲酶的微生物，所以该培养基应以尿素为唯一氮源的培养基上。在这样的培养基上长出的细菌不一定都能产生脲酶，因为有些固氮的微生物也能生存。如果加入酚红能出现红色的菌落就是目的菌落。

    （2）计数应取平均值。如果稀释度不够高，所得数据应比实际数值偏小，因为菌落都是在一起的。平板划线法每次划线后接种环必须进行灼烧灭菌才能再次划线。保存菌种不能密封原因是细菌进行有氧呼吸需要气体流通，否则会无法生存。

    土壤中分解尿素的细菌

    分解纤维素的微生物

    ①选择培养基的成分：尿素作为唯一的氮源

    ②鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，pH升高，说明细菌能分解尿素

    ①选择培养基的成分：纤维素作为唯一的碳源

    ②鉴定方法：刚果红染色法，即刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，培养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈

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