[题目]为增加菊花的花色类型.研究者从其他植物的cDNA文库中提取出花色基因C(图1),拟将其与质粒(图2)重组.再借助农杆菌导入菊花细胞中.图3从上到下依次表示EcoRⅠ.BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制酶的识别序列与切割位点.请分析回答:(1)利用PCR技术扩增目的基因C的原理是 .(2)图2所示质粒被切割获得的产物可与图1所示基因C连接.理由是 .(3)� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】为增加菊花的花色类型，研究者从其他植物的cDNA文库中提取出花色基因C(图1),拟将其与质粒（图2)重组，再借助农杆菌导入菊花细胞中。图3从上到下依次表示EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制酶的识别序列与切割位点。请分析回答：

（1）利用PCR技术扩增目的基因C的原理是_____________。

（2）图2所示质粒被___________切割获得的产物可与图1所示基因C连接，理由是___________。

（3）经BamHⅠ处理后构建的重组质粒导入菊花细胞后，基因C不能表达，原因是质粒酶切部位的两端无，导致基因C不能_____________。

（4）在添加四环素的固体培养基上，___________(填“能”或“不能”）筛选出含有插入基因C的重组质粒的农杆菌单菌落，原因是_________________________。

【答案】 DNA双链复制 BamHI和Sau3AI 两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端启动子和终止子转录不能含质粒的农杆菌和含重组质粒的农杆菌均含有抗四环素基因，在含四环素的培养基上均能生长

【解析】试题分析：试题分析：本题结合图解，考查基因工程的相关知识，要求学生识记基因工程的操作步骤及各步骤中需要注意的细节，能正确分析题图，从图中提取信息准确答题，属于考纲理解和应用层次的考查。基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）利用PCR技术扩增目的基因C的原理是DNA双链复制。

（2）据图3可知，由于BamHⅠ和Sau3AⅠ两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端，因此图2所示质粒被BamHⅠ和Sau3AⅠ切割获得的产物可与图1所示基因C连接。

（3）据图可知，经BamHⅠ处理后构建的重组质粒导入菊花细胞后，基因C不能表达，原因是质粒酶切部位的两端无启动子和终止子，导致基因C不能转录。

（4）由于含质粒的农杆菌和含重组质粒的农杆菌均含有抗四环素基因，在含四环素的培养基上均能生长，所以在添加四环素的固体培养基上，不能筛选出含有插入基因C的重组质粒的农杆菌单菌落。

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