Question

【题目】大肠杆菌是寄生于人和动物肠道中的细菌，其代谢产物能与染料伊红美蓝反应，使菌落呈黑色。某生物科技小组的同学拟对某地严重污染的水体中细菌种类、大肠杆菌数目进行调查，实验及流程如下：

实验一：滤膜法测定大肠杆菌数目：

用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到伊红美蓝培养基（EMB培养基）上培养→统计菌落数目。

实验二：大肠杆菌的培养和分离：

配制培养基→灭菌→扩大培养→划线分离和培养→菌种保存。

回答下列问题：

（1）实验一中，过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，通过________方法进行灭菌处理。统计大肠杆菌菌落时应选择颜色为________的菌落进行计数。

（2）实验二中，“划线分离和培养”前应对样品进行________，这样，“划线分离和培养”过程后，一个菌体便会形成一个________，这种分离方法是纯化菌种的常用方法。

（3）实验一和实验二中均用到固体培养基，配制培养基过程中，除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持培养基的________。获得纯净培养物的关键是________，所以对所用培养基均需进行灭菌处理，为检测灭菌是否彻底，应进行的操作是________________________；一般对所需菌种长期保存可采用________的方法。

Answer 1

【答案】高压蒸汽灭菌 黑色 充分稀释 （单）菌落 渗透压 防止杂菌的污染 将未接种的培养基在恒温箱中培养一段时间，观察培养基上是否有菌落产生 甘油管藏

【解析】

滤膜法是检测水样中大肠细菌群的方法，将一定量水样注入已灭菌的微孔薄膜的滤器中，经过抽滤，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴于伊红美蓝培养基上，经培养后计数和鉴定滤膜上生长的大肠菌群菌落，依据过滤水样计算每升或每100毫升水样中的大肠菌群数；该方法操作简单、快速，主要适用于杂质较少的水样。

（1）实验一中，过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，通过高压蒸汽灭菌方法进行灭菌处理。统计大肠杆菌菌落时应选择颜色为黑色的菌落进行计数。

（2）实验二中，“划线分离和培养”前应对样品进行一定比例的稀释，这样，“划线分离和培养”过程后，一个菌体便会形成一个菌落，这种分离方法是纯化菌种的常用方法。

（3）实验一和实验二中均用到固体培养基，配制培养基过程中，除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持培养基的渗透压。获得纯净培养物的关键是 防止杂菌污染，所以对所用培养基均需进行灭菌处理，为检测灭菌是否彻底，应进行的操作是将未接种的培养基在恒温箱中培养一段时间，观察培养基上是否有菌落产生；一般对所需菌种长期保存可采用甘油管藏的方法。